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| 陆英的GC指纹图谱研究 [发布时间： 2006年3月1日15:59:55 来源：中药研究与信息] |
| 田晓玲，毕开顺 [摘要]目的：建立陆英气相色谱（GC）指纹图谱的研究方法。方法： 采用GC法，以HP-5石英毛细管色谱柱，FID 检测器，研究陆英的GC指纹图谱。结果：陆英的GC指纹图有11个共有峰，精密度和稳定性等均符合要求。结论： 该方法准确、简单，为陆英的鉴别和质量检测提供了依据。 [关键词] GC；陆英；指纹图谱 陆英Sambucus chinensis Lindl.为忍冬科接骨木属植物，又名八棱麻、接骨木、八里麻等，多年生草本，产于我国南北各地，以根、茎、叶入药，是我国民间常用草药，有活血散瘀，祛风活络，发汗利尿之功效。用于治疗跌打损伤、风湿痛、脱臼、肾炎水肿、脚气水肿、荨麻疹。江西宜春应用陆英及其制剂治疗肝炎取得了显著效果。 由于中药材的药效不是来自任何单一的活性成分，而基本上是多种活性成分，甚至与“非活性成分”的协同作用或“生克作用”。天然药物质量评价方法是对某一化学成分进行定性或定量分析，而对大多数中药来说，任何单一活性成分或指标成分都难以准确地评价中药的真伪和优劣，因而提出了指纹图谱检测标准。本文采用GC 法建立陆英药材的指纹图谱，可作为其内在质量控制的标准。 1 仪器与试剂 Agilent 6890N 气相色谱仪（配有FID检测器、自动进样器），Chem Station工作站（Agilent科技有限公司），R-205型旋转蒸发仪（BUCHI公司），Sarturius-BS110S 分析天平（北京赛多利斯天平有限公司），KQ-250DB 型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。甲醇（色谱纯，TEDIA）。β-谷甾醇对照品β-sitosterol [DELTA (甙尔塔)天然有机化合物(中药有效成分标准品和对照品) 研究中心]。10个批次的陆英药材（来源：1 贵州，2 湖南Ⅰ，3 江西抚州Ⅰ，4 江西抚州Ⅱ，5 江西万载，6 江苏Ⅰ，7 湖南Ⅱ，8 江苏Ⅱ，9 江苏，10 云南，经沈阳药科大学孙启时教授、江泽荣教授鉴定）。 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取5mL 置50mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得20μg/mL的β-谷甾醇对照品溶液。 样品供试液的制备：精密称取于60℃干燥40min的陆英药材2.00g，加95％乙醇100mL，索氏提取3h，乙醇提取液置旋转蒸发仪上减压蒸干后，残渣加甲醇适量溶解并转移至50mL量瓶中，最后加甲醇至刻度，摇匀，作供试液，进样前用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。 2 . 2 指纹图谱检测条件 色谱柱：HP-5(3m×0.32mm，0.25mm膜厚)；进样口温度：28 0℃；检测器温度：280℃；进样体积：1.0μL；炉温：200～280℃，程序升温保持5min，以10℃/min的速度升至250℃，保持5min，再 以3℃/min的速度升至280℃保持15min；载气：纯氦；柱压3.5PSI；分流比20:1；氢气流速45mL /min；空气流速450mL/min。 2.3 参照物峰的选择 将对照品溶液和样品供试液分别进样1μL，记录色谱图，对照品色谱图见图（A），陆英样品色谱图见图（B），对比保留时间可知S峰为β-谷甾醇（tR为min）。在样品供试液中加入对照品溶液，进样，记录色谱图见图（C），色谱峰增益结果也证明了上述推断的正确性。测得β-谷甾醇理论塔板数为165495。由于β-谷甾醇峰与其他峰分离较好，保留时间适中，而且在样品色谱图中相对稳定，所以，选定β-谷甾醇为参照峰建立指纹图谱。 2.4 精密度试验 以湖南Ⅰ药材制备的样品为供试品，1d 内连续进样5次，记录色谱图。记录各色谱峰的保留时间和积分面积。以β-谷甾醇的保留时间和积分面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和相对积分面积，结果显示，样品供试液的分析结果稳定，共有峰的相对保留时间和相对积分面积相当一致，RSD均小于3%，表明仪器等整个检测系统的精密度良好。 2.5 溶液稳定性试验 取湖南Ⅱ样品，按2.1中方法制备供试液，分别在制备样品后的0，2，4，6，12h进样测定，记录色谱图。计算各峰的相对保留时间和相对峰面积，各峰的相对保留时间的RSD小于1.0%，相对峰面积的RSD均小于5%。结果证明样品在12h内基本稳定。 2.6 重复性试验 精密称取湖南Ⅱ样品，按2.1中方法制备供试液5份，并进行检测，记录色谱图，计算相对保留时间和相对峰面积的RSD，各峰相对保留时间的RSD均小于1.5%，相对峰面积的RSD 均小于5%，结果表明方法重复性较好。 2 . 7 陆英对照指纹图谱的建立 按照指纹图谱的建立方法，取已收集到的10个不同产地的陆英药材制备供试液，将供试液在气相色谱仪上进样分析，记录色谱图，将各色谱文件以*.AIA格式的文件导出，在《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》( 国家药典委员会)软件中导入，得到陆英对照指纹图谱，共有11个共有峰，以β-谷甾醇的保留时间和峰面积为参照，得到11个峰的保留时间(T)、相对保留时间(RT)、峰面积(A)和相对峰面积(RA)。 2.8 不同产地陆英GCFP与对照指纹图谱的相似度 将“2.7”项下测得的各产地的陆英的GCFP导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件，计算出各批次的陆英与对照指纹图谱的相似度，分别为0.93，0.95，0.74，0.97，0.98，0.98 ，0.96 ，0.97，0.92，0.85。其中3 号样品和10号样品与标准CEFP相似度较低（相似度为0.85和0.74）。 3 讨论 3.1 色谱柱的选择 分别试验了DB-1，HP-5，HP-35等不同极性的毛细管色谱柱。DB-1，HP-35色谱柱在不同的温度下均出现较大的宽峰，色谱峰分离不理想，而HP-5柱的分离效果理想，所以选择HP- 5 柱。 3.2 柱温的选择 由于陆英成分复杂，各组分难于分离，恒定柱温达不到理想的分离，因此，选择程序升温。实验中共选择了6种升温程序，最终确定本实验条件。 3.3 药材提取溶剂的选择 分别以95%，75%，50%，25%乙醇为溶剂，按“2 . 1 ”项下方法制备陆英供试液，进样分析。发现以95％乙醇为溶剂制备样品所得的色谱图的峰数较多，各峰的分离情况较好，因此选择95％乙醇作提取溶剂。 参考文献 [1]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编（上册）[M].北京：人民卫生出版社，1983.437. [2]江西省宜春地区陆英临床研究协作组.陆英冲剂治疗急性病毒性肝炎304例疗效观察[J].中草药通讯，1978，7:25-27. |