[摘要]目的：研究山东产金银花乙醇提取物的
指纹图谱。方法：采用光谱学及色谱学方法，确定醇提取活性成分的HPLC和NMR的特征吸收图谱。结果：醇提取活性成分有专属的特征吸收图谱，重现性好。结论：综合对照上述指纹图谱，可用于金银花
中药材的质量控制，也可用于其复方
制剂质量的参考标准。
[关键词]金银花；指纹图谱；HPLC；NMR
金银花Flos lonicerae japonicae 又名忍冬花，为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，夏初花开放前采收，干燥。药理作用研究表明，金银花具有抗菌、抗病毒、解热、抗炎、保肝、止血、抗氧化、免疫调节等作用。由于受采集季节、采集部位及加工炮制方法的不同，其活性成分的种类及含量有所不同，因此有必要建立其指纹图谱，用作单味中药材及其配伍后复方制剂的质量控制。笔者采用高效液相色谱及核磁共振的方法，对山东产金银花乙醇提取物活性成分进行系统研究，建立了其特征吸收图谱。
1 仪器与试药
1.1 药材与试剂 金银花购自山东蒙山，由山东中医药大学中
药学院鉴定；甲醇为色谱纯；磷酸、乙醇为分析纯；蒸馏水，DMSO（氘代试剂），绿原酸对照品（购自中国药品生物制品
检验所）。
1.2 仪器 超声波药品处理机（济宁科特超声电子有限责任公司），Waters 高效液相色谱仪996 二极管阵列检测器，Varian INOVA 600型超导傅立叶变换核磁共振波谱仪，METTLER TOLEDO 电子分析天平(梅特勒- 托利多仪器有限公司)，粉碎机(河北省黄骅市振兴机电仪器厂) 。
2 方法
2.1 提取分离 准确称取金银花5g，加85%乙醇100mL，在150W 超声震荡提取30min，过滤，加蒸馏水定容至150mL，混匀，作为待测溶液。
2.2 HPLC 色谱法分析 色谱柱HYPERSIL ODS-2(250mm×4.6mm，5μm)，检测波长：254nm，柱温：室温，流动相：A液为甲醇，B液为0.55% 磷酸水溶液，进样量：10μL，绿原酸t R=16.3min。
2.3 含量测定 用上述待测溶液进样，在上述色谱条件下得到色谱图。以峰面积按外标法计算绿原酸的含量。
2.4 NMR法分析 将上述待测溶液抽干成粉末，用Varian INOVA 600型超导傅立叶变换核磁共振波谱仪在25℃测定，扫描次数为16次，DMSO-d6 作溶剂。
3 结果
3.1 HPLC 色谱结果 待测溶液在上述条件下测定，得到HPLC色谱图。
3.2 NMR 法结果 待测样品按上述方法扫描，得到HNMR 谱图。比较4 个批次的图谱，解析发现它们相似度很高，化学位移和峰型均可很好地吻合，解析后得到共有特征峰，以化学位移表示：7.39±0.02，7.03，6.96，6.75，6.13±0.05，5.05±0.06，3.91±0.05，3.56±0.02，2.00±0.03，1.94±0.01，1.77±0.03。
将待测样品按上述方法扫描，得到CNMR谱图。比较4个批次的图谱，解析发现它们相似度也很高，化学位移和峰型也都可很好地吻合，解析后得到共有特征峰，以化学位移表示：36.19±0.2，37.22±0.15，68.02±0.20，70.33±0.01，70.92±0.3，73.46±0.3，114.30±0.26，114.80±0.05，115.77±0.1，121.42±0.08，125.62，145.00±0.01，
145.59±0.1，148.38±0.07，165.76±0.28，174.98±0.31。
4 讨论
4.1 从HPLC 色谱图中可见乙醇提取物中有多种成分，采用绿原酸标准加入法，结果绿原酸峰面积成比例增加，说明该峰即为金银花中主要活性成分绿原酸的吸收峰。
4.2实验中药材和中间体的核磁共振指纹图谱均有很好的重现性，相似度达到90%以上。通过比较和分析具代表意义的共有峰，可以判断药材优劣。核磁共振指纹法作为检测手段是能够很好的表征中成药内在化学成分特征及相对之间含量的差异。它的可靠性是无容置疑的，可以预言，随着核磁共振指纹法的深入研究，必将在中药现代化，中药走出国门等方面发挥重要作用。
作者：
2006-3-29