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琼脂糖凝胶电泳法

来源:医学加加
摘要:0)取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节pH至3。0,再加水至1000ml。1g,加水100ml使溶解。操作(1)制胶取琼脂糖约0。...

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  1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。

  2.试剂

  (1) 醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节pH至3.0,再加水至1000ml。

  (2) 甲苯胺蓝溶液 取甲苯胺蓝0.1g,加水100ml使溶解。

  3.操作

  (1)制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻璃板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。

  (2) 标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下规定配制。

  (3) 点样与电泳 在电泳槽内加入醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0),将凝胶板置于电泳槽架上,经滤纸桥浸入缓冲液。于凝胶板负极端分别点样1μl,立即接通电源,在电压梯度约30V/cm,电流强度1~2mA/cm的条件下,电泳约20分钟,关闭电源。

  (4) 染色与脱色 取下凝胶板,用甲苯胺蓝溶液染色,用水洗去多余的染色液至背景无色为止。

作者: 2007-9-25
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