摘要:细胞培养的一般过程 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其...
07-09-25摘要:将细胞内的酶与底物相互作用,再将酶反应的产物作为反应物质,在酶的作用部位进行捕捉,使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物,经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。酶的细胞...
07-09-25摘要:高通量细胞筛选技术(high2throughput cell-based screening technology) 是以高通量方式研究基因功能最有效的方法之一。通常,基因功能的初步筛选在96 孔或384 孔板上进行,通过基因转染将候选基因导入细胞,或直接将...
07-09-25摘要:分为六个阶段:阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链阶段2:cDNA第二链的合成阶段3:cDNA的甲基化阶段4:接头或衔接子的连接阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接[阶段1:反转录...
07-09-25摘要:PCR反应条件为温度、时间和循环次数。温度与时间的设置: 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90~95℃变性,再迅速冷却至40 ~60℃,引物退火并结合到靶序...
07-09-25摘要:标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0。5mmol/L 加双或三蒸水至 100ulPCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和...
07-09-25摘要:此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。3、超...
07-09-25摘要:一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞...
07-09-25摘要:基因疫苗指的是DNA疫苗,即将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上,然后将质粒直接导入人或动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答。抗原基因在一定时限内的持续表达,不断...
07-09-25摘要:从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x轴和y轴参数。 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测...
07-09-25摘要:基本原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细...
07-09-25摘要:基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细...
07-09-25摘要:基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性,主要包括以下几...
07-09-25摘要:7月25日,复旦大学对外发布了一项基因研究领域里的重大成果,他们发现了破解基因“天书”的密码,这项具有“里程碑”意义的研究将在8月12日刊登在国际生物界权威杂志《细胞》的封面上。如果说人们现在为长不高而烦...
07-09-25摘要:等密度离心分离样品主要是根据被分离样品的密度。在这种离心分离方法中,要用介质产生一种密度梯度,这种密度梯度覆盖了待分离物质的密度,这样,通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。在这种梯度离心...
07-09-25摘要:这一方法需要用蔗糖或甘油制备轻微的连续密度,然后将待分离的样品加在离心管的最上层,形成一狭窄的带,再通过较长时间的离心。在离心过程中,大小、形状、密度不同的颗粒就会分开,最后收集各区带得到要分离的物...
07-09-25摘要:主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低,让较大的颗粒沉降到管底,小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀,改用较高的离心速度离心悬浮液,将较小的颗粒沉降,以此类推,达到...
07-09-25摘要:在显微镜下,用显微操作装置对细胞进行解剖手术和微量注射的技术属显微操作技术。显微操作仪是在显微镜下对细胞进行显微操作的装置,可用于细胞核移植、基因注入、染色体微切和胚胎切割等手术。
07-09-25摘要:1975年英国科学家Milstein和Kohler所发明,并获得1984年诺贝尔医学奖。它是将产生抗体的单个B淋巴细胞同肿瘤细胞杂交,获得既能产生抗体,又能无限增殖将杂种细胞,并以此生产抗体的技术。其原理是: B淋巴细胞能...
07-09-25摘要:在自发或人工诱导下,两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。有性繁殖时发生的精卵结...
07-09-25摘要:植物受创伤后,在伤面新生的组织称为愈伤组织。其原因是由于受创伤的刺激后,伤面附近的生活组织恢复了分裂机能,加速增生而将伤面愈合。在植物组织培养中的愈伤组织是指植物细胞在组织培养过程中形成的无一定结构...
07-09-25摘要:原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把第一代至第十代...
07-09-25摘要:细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域,主要利用细胞生物学的原理和方法,结合工程学的技术手段,按照人们预先的设计,有计划地改变或创造细胞遗传性的技术。
07-09-25摘要:⑤ 不需任何透镜,体积小,有人称之为“口袋显微镜“(pocket microscope)。
07-09-25摘要:在冰冻断裂技术的基础上发展起来的更复杂的复型技术。如果将冰冻断裂的样品的温度稍微升高,让样品中的冰在真空中升华,而在表面上浮雕出细胞膜的超微结构。
07-09-25摘要:在真空条件下,用冰刀横切冰冻样品,使样品内层被分开露出两个表面。
07-09-25摘要:在基础医学研究中涉及越来越多的如某一疾病状态组织中,多种基因或遗传变化,区别发展中的组织细胞群以及疾病状态组织细胞,将有助于了解疾病发生的分子机制。然而,即使是最经典、可靠的检测方法,也不可避免混杂...
07-09-25摘要:Cytometric Bead Array(CBA)虽然液相蛋白定量检测的技术很多,但是大多数的技术仅能对样本进行单一指标的检测。检测多个指标时则需要提供大量的样本分批检测,操作繁琐。对于样本量较少或需要对比各指标的用户,...
07-09-25摘要:(一)动物的选择与免疫1.动物的选择 纯种BALB/C小鼠,较温顺,离窝的活动范围小,体弱,食量及排污较小,一般环境洁净的实验室均能饲养成活。2.免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量...
07-09-25摘要:名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag8(X63)BALB/C骨髓瘤MOPC-218-氮鸟嘌呤r1 KP3/X63-Ag8。653(X63-Ag8。653)P3/X63-Ag88-氮鸟嘌呤- -P3/NSI-1-Ag4-1(NS-1)P3/X63-Ag88-氮鸟嘌呤- K(不分泌型)P3/X63-Ag8。...
07-09-25摘要:刮除程序为:(1)标记:镜下观察,用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。(2)刮除:弃掉培养液,把无菌胶刮伸入瓶皿中,肉眼或显微镜窥视下,刮除无标记空间。(3)用Hanks液冲洗一两次,洗除被刮...
07-09-25摘要:l、4ml肝素抗凝血于离心管中,加入2ml RPMI 1640。2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。 5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中,加入10μl环...
07-09-25摘要:2、成纤维细胞排除:在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞,培养时能与瘤细胞同时生长,并常压过癌细胞,导致癌细胞生长受阻以至消失,应仔细排除。3、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率根据实验经验,肿瘤细胞在体外...
07-09-25摘要:如何选用培养基。培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养,各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基...
07-09-25摘要:(一)原理体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培...
07-09-25摘要:(一)原理细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传...
07-09-25摘要:如何选用特殊细胞系培养基。 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始,各种目的无血...
07-09-25摘要:o 应如何避免细胞污染。细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原体。 主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。 严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之...
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