摘要:⑴脐带收集:用无菌止血钳夹闭脐带两端,在止血钳外侧剪断脐带,放入盛有4℃Cord Buffer的饭盒内。脐带在4℃放置不应超过24小时。⑵ 脐带内皮细胞分离带无菌手套,取出脐带,在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后...
07-09-25摘要:细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下几种方法: 1 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-media...
07-09-25摘要:1 PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生, 可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过...
07-09-25摘要:流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是:①测量速度快,最快可在1秒种内计测数万个细胞。②可进行多参数测量,可以对同一个细胞做有关物...
07-09-25摘要:1.在96孔细胞培养板各孔中加0。1ml含5×104~10×4 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。1ml 10%甲醇溶液固定细胞30秒钟。1ml...
07-09-25摘要:1.按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。2.吸去培养液,用PBS洗涤两次(如为悬浮细胞,应在吸去上清液前先离心)。3.每孔加60μl NAG染液,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4小...
07-09-25摘要:一、原位缺口翻译检测裂解的DNA片段1.取106经促调亡物质处理的细胞,用1% BSA-PBS洗涤细胞后加入0。1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体,4℃ 20分钟。用1% BSA-PBS洗涤细胞。2.加入0。
07-09-25摘要:1.用不同方法诱导细胞调亡后,取106调亡细胞,置1。0,在旋涡混悬器上混悬20秒钟,破坏细胞,变性蛋白质。4.用50ml TAE溶解2g琼脂糖,加入0。调亡细胞的DNA呈相差200bp的条带的梯形图。
07-09-25摘要:1.用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞,30℃水浴10分钟。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2.用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞,吸管上下吹打5~6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性,应...
07-09-25摘要:一、DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移(ISNT)1.切片常规脱蜡,梯度乙醇复水化。2.将切片组织浸入2×SSC液中,80℃,20min,然后蒸馏水冲尽。0)37℃消化0~20min,PBS洗尽。4.用滤纸擦干组织块周边...
07-09-25摘要:1.细胞以1。5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0。4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
07-09-25摘要:1.体外细胞培养结束后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,置于振荡器上摇20min。2.固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。4.加入0。1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min。
07-09-25摘要:1.96孔细胞培养板中培养细胞,去培养液。01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。5.在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度,将细胞培养板其中不含细胞,同样处理过的一孔作为空白对照,所测的每孔光吸收度...
07-09-25摘要:方法一:1.收集细胞(5×106)1000r/min,离心5min,去上清。2.PBS洗一次,1000r/min,离心5min,去上清。3.加细胞核裂解液500μl重悬细胞,50℃水浴,3~5h,不时振摇或37℃过夜。5ml平衡酚抽提,上下颠倒几次...
07-09-25摘要:02%的EDTA消化使之脱壁,每样本细胞数为(1~5)×106,500~1000r/min离心5min弃去培养液。2.用孵育缓冲液洗1次,500~1000r/min离心5min。3.用100μl的标记溶液重悬细胞,室温下避光孵育10~15min。4.500~...
07-09-25摘要:1.悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342,终浓度为1μg/ml。25%胰蛋白酶消化成单细胞悬液,离心,弃上清,用1ml全培养液重悬细胞,加入Heochst 33342,终浓度为1μg/ml,37℃孵育7~10min。0ml PI染液,...
07-09-25摘要:1.离心收集细胞,PBS洗1~2次2.1%多聚甲醛低温下固定15min。3.3ml PBS洗1次,70%乙醇固定,冰箱内放置1~3天。4.PBS轻洗1次。6.PBS轻洗1次。
07-09-25摘要:1.离心收集细胞,PBS洗1~2次。4.PBS轻洗1次5.细胞与TdT标记液37℃孵育,时间1~2h。7.细胞在黑暗中37℃与100μl的染色缓冲液孵育30min。10. 流式细胞仪分析红色(PI)对绿色荧光(FITC)的地形图。
07-09-25摘要:方法一1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心...
07-09-25摘要:5克PEG(MW=4,000)放入试管内,在酒精灯上融化之,迅速加入0。5ml预热的Hanks液混匀制成50%的PEG溶液。(3)取上述10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中,再加入5ml Hanks液混匀,然后以1,000rpm离心5分钟,小心弃去上...
07-09-25摘要:(2)组织切片/培养细胞在经过处理,抹以粘附剂的载片上,在43℃烤箱过夜。2)中浸5~10min。1mol/L甘氨酸—PBs 液内5min。3%Triton X-100(在PBS内)10~15min。
07-09-25摘要:载体(Vector)是把外源DNA(目的基因)导入宿主细胞,使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒(plasmid)、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒(粘粒)、病毒等。载体具有能自我复制。质粒存在于多种细菌,是...
07-09-25摘要:流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标...
07-09-25摘要:细胞培养的一般过程一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其...
07-09-25摘要:如果您有新的国内外细胞产品资源信息,请发送给我们,我们整理后会放上来供大家一起享用:国内细胞库1、 上海细胞库 2、 昆明细胞库3、 成都基因治疗肿瘤药物工程技术研究中心细胞及载体服务4、 南京中医药大学新...
07-09-25摘要:血清必须贮存于–20 ~ -70 oC,若存放于4 oC,请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶,可将40~45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容...
07-09-25摘要:1.1M Tris 溶液的配置取Tris242。2g,加ddH2O至1600ml,加热溶解。0溶液的配置 取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8。5ml),加ddH2O定容至200ml,高压灭菌备用。
07-09-25摘要:1.标本采集在无菌条件下于健康产妇分娩后立即取新生儿脐带,挤出脐带血管中的血液,放入装有含青链霉素的PBS液瓶中,2h之内行脐静脉内皮细胞培养。2.原代血管内皮细胞的获取与培养按Jaffe等人〔1〕的方法加以改...
07-09-25摘要:收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于–70°C,隔夜后,移到liqN2)。冷冻细胞解冻程序:2。依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、...
07-09-25摘要:欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态,约为80–90%致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。注意冷冻保护剂之品质。22micr...
07-09-25摘要:计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber中细刻9个1mm2大正方形,其中4个角落之正方形再细刻16个小格,深度均为0。使用时,计数每个大正方形...
07-09-25摘要:冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。1操作人员应...
07-09-25摘要:细胞库之细胞培养基不加抗生素1。培养自ATCC引进之细胞株,培养基中不加抗生素。培养自其它实验室引进之细胞株,制作tokenfreeze前培养基须添加抗生素,待tokenfreeze通过污染测试后,大量培养时则不加抗生素。寄...
07-09-25摘要:细胞培养实验用品均为无菌,除了玻璃容器与pasteur pipet 外,其它均为塑料无菌制品。 TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附,培养容器种类有Tflask, plates, dishes, roller bottle 等,依实验需要...
07-09-25摘要:(1)实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70% 酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作。每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染。实验结束后,将实验物品...
07-09-25摘要:1 实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘。细...
07-09-25摘要:不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。因...
07-09-25摘要:1 合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。血清是细胞培养液中最重要的成分之一...
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