摘要:直接培养法·原理:直接培养支原体于培养基中,观察其生长及菌落生成。 ·缺点:培养时间长,须3-5星期才能判断。有些支原体不能在培养基培养出来 (例如M。需同时培养支原体株作为正反应对照组,可能会造成污染。
07-09-25摘要:1支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0。它不同于细胞,也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长,营养要求...
07-09-25摘要:支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物.约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性.可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变,在光境下不易看清内部结构。电镜下观察...
07-09-25摘要:线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断...
07-09-25摘要:流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是:①测量速度快,最快可在1秒种内计测数万个细胞。②可进行多参数测量,可以对同一个细胞做有关物...
07-09-25摘要:1.实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml(勿注入肠内)。4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。6.小心拔出针...
07-09-25摘要:骨骼肌细胞培养1.杀死动物,无菌取大腿肌组织,切成0。2.用不含钙镁离子的Hanks液配的0。25%胰蛋白酶消化,无菌纱网或纱布滤过,合成培养基加10%小牛血清培养,为促进分化可加1%的胎汁。3.细胞接种量为2×1...
07-09-25摘要:一、机械刮除法1.标记:镜下观察,用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。2.刮除:弃掉培养液,把无菌胶刮伸入瓶皿中,肉眼或显微镜窥视下,刮除无标记空间。3.用Hanks液冲洗一两次,洗除被刮掉的...
07-09-25摘要:1.获取脑组织后,先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分,置入Hanks液中漂洗1~2次后,置于30~50倍的Hanks液中,脑组织比较柔软,反复吹打即可制成细胞悬液。2.为排除脂肪成分和其它碎块,把悬液注入离心管中,在室温...
07-09-25摘要:1. Fen细胞培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中,在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。02% EDTA的PBS消化细胞5分钟,洗涤后,用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。2. 取96孔细胞培养板,每孔加0。1ml细胞悬液,...
07-09-25摘要:一、用51Cr铬酸钠标记靶细胞短期标记法1.用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞,去上清液。5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。7MBq)51Cr铬酸钠,37℃水浴中标记1小时,每5~10分钟摇晃一次,混匀细胞。2.如上用...
07-09-25摘要:1.ATP反应液(Bio-Orbit)是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、0。2.在已经完成促增殖或抑生长试验后的96孔细胞培养板中(每孔含100μl细胞培养液),每孔加0。1ml ATP释放因子,室温中反应5分钟。取另一块9...
07-09-25摘要:1.培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞(检测IL-2),或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5。12细胞(检测IL-3)到对数生长期。2.取96孔细胞培养板,每孔加0。1ml含1×104~2×104上述细胞之一的DMEM培养液(...
07-09-25摘要:1.取96孔细胞培养板,每孔中加0。1ml含2×104~10×104靶细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2~3小时让细胞帖壁(如果是悬浮细胞可直接进行下一步...
07-09-25摘要:1.用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。2.用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培...
07-09-25摘要:3个对照孔只加效应细胞。8个对照孔只加靶细胞。4个对照孔只加细胞培养液。4.直接在荧光检测仪上检测荧光强度,激发波长530nm,发射波长590nm。
07-09-25摘要:PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、PI(e。1%叠氮钠A、PI缓冲液用缓冲液将PI溶解至终浓度为1mg/ml中,于4℃下密封避光保存1个月。
07-09-25摘要:无菌条件下取出小鼠移植瘤组织,剪成1mm3小块,用0。2%胰酶消化5~8分钟,在消化过程中用吸管吹打组织块或用自制装置(分别作为加样和收集器的两个注射器中间加一小滤器连接而成,滤器中间垫两层丝质材料以隔断组...
07-09-25摘要:SD大鼠颈椎脱臼法处死,75%乙醇浸泡1~2分钟,2次,置超净台内,打开腹腔取出肾脏剪碎,置含Hank’s液的无菌培养皿洗涤,置80目不锈钢筛网上。用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网,滤过组织Hank’s液混合...
07-09-25摘要:各种肌组织均可用于培养,以心肌和骨骼肌较实用。(-)骨骼肌细胞培养1、出生1一2天的乳鼠,引颈处死。3、计数调整细胞密度。4、快接种量2×106/皿入培养基培养。
07-09-25摘要:内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞,对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子(TAF)等有很大价值。 研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便,其法如下:1、产后新鲜脐带,无菌剪取10—15厘米...
07-09-25摘要:上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细...
07-09-25摘要:一、概念 1、细胞系(Cell Line):原代培养舞经首次传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系(Lineage of Cells)所组成。 2、细胞株(Cell Strain):通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞...
07-09-25摘要:肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的...
07-09-25摘要:感染悬浮细胞是使杆病毒系统生产蛋白的普遍方法。悬浮培养的细胞很容易从10ml扩大到100L。一般来说,悬浮的细胞在无血清的培养液中培养。这种培养液许多公司有售,比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、...
07-09-25摘要:一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及...
07-09-25摘要:一、原理 体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比,它是测定细胞周...
07-09-25摘要:一、原理将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。二、仪器、材...
07-09-25摘要:1.翻倍时间(Doubling Time)细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的参数中是最容易测量的。翻倍时间应该在细胞处于对数期复制时测量,对于Sf9和Sf21细胞来说通常是介于16-24小时之间,不过大多数在20-22小时。...
07-09-25摘要:第一阶段:1.准备合适体积的由25%体积新培养液和75%旧培养液(即细胞原先适应的培养液)组成的混合培养液I。2.将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液I中。3.使细胞生长到通常培养时的较...
07-09-25摘要:高MOI( Multiplicity Of Infection,等于用于感染的病毒数目与细胞数目的比值)感染是生产蛋白的最好方法。一是不用考虑DIP(Defective Interfering Particles,即只包装入部分基因组的病毒颗粒)的形成,因为关...
07-09-25摘要:一、原理 细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用...
07-09-25摘要:选择适当大小孔径的Filcon 滤器过滤细胞悬液。250g离心细胞悬液5分钟。用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。
07-09-25摘要:组织数量(3-6mm3小块)脉冲时间条件乳腺组织3-62次30秒新鲜或冷冻膀胱4-52次20秒新鲜或冷冻结肠3-62次20秒新鲜或冷冻胃4-62次20秒新鲜或冷冻胃肿瘤边缘组织3-62次20秒新鲜或冷冻健康组织、胃肿瘤3-42次20秒新...
07-09-25摘要:基本原理通过在支持物(如盖玻片)上培养贴壁细胞,可以应用抗体检测细胞表面抗原的表达或进行酶细胞化学以及免疫细胞化学检测。6孔平底组织培养板,或φ60 mm培养皿。18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的盖...
07-09-25摘要:基本原理:在长期的细胞培养过程中可能会出现微生物污染或基因型改变等情况,会导致具有优良特性细胞系的丢失。为防止这些细胞的丢失,细胞可以经快速冷冻并几乎无限期保存在非常低的温度下,如液氮(-176℃)。试...
07-09-25摘要:流式细胞仪血小板分析应用范围 通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成,分析血小板活化,血小板对刺激物的反应性 通过分析受激后表面结合蛋白触发凝血链式反...
07-09-25摘要:吸除培养瓶内旧培养液。 置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。 吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以...
07-09-25摘要:剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底...
07-09-25摘要:准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污。如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 剪切:用眼科剪...
07-09-25