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细胞表面抗原染色的组织样本制备方法

来源:医学加加
摘要:选择适当大小孔径的Filcon滤器过滤细胞悬液。250g离心细胞悬液5分钟。用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。...

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  1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用缓冲液或培养液浸湿。

  2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon 二遍。

  3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中,盖上盖子,将Medicon 插入到Medimachine中。

  4.降解组织。降解组织的时间长短依赖于组织类型。(参见降解时间表)。

  5.用注射器通过 Medicon上的注射器接口将上清吸去。

  6.用1ml缓冲液或培养液冲洗Medicon三遍。

  7.选择适当大小孔径的Filcon 滤器过滤细胞悬液。(50-mmFilcon 适用 于大 多数组织,如:淋巴结、肿瘤组织、皮肤组织)

  8.用1ml缓冲液或培养液冲洗Filcon三遍。

  9.250g离心细胞悬液5分钟。

  10.用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。

  11.若需要,重复3-10步骤。

  12.调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。

  13.用适当浓度的抗体在2-80C与100ml细胞悬液孵育15-30分钟。

  14.加2ml 冷的缓冲液或培养液(2-80C), 250g离心5分钟。

  15.用缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。

  16.分析样本。

作者: 2007-9-25
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