我国人免疫缺陷病毒感染者病原学和免疫学指标及其临床症状的关系

　　【摘要】　目的　研究中国人免疫缺陷病毒(HIV)感染者实验指标在临床进展中的意义及各指标间的相互关系。方法　对我国190例HIV感染样品进行了测定，主要指标包括血浆病毒载量、P24抗原检测，病毒培养及T淋巴细胞亚群计数。结果　血浆HIV病毒载量、CD₄计数及CD₄/CD₈比值与临床进程明显的相关(P＜0.01)；血桨p24抗原检测阳性率在实验数据中未表现与临床发病明显的相关性；病毒培养阳性率与临床发病状况有关；CD₈计数与感染时间和发病有相关关系，在发病病人中CD₈略现下降(P=0.01)。以上指标中病毒载量与CD₄计数及CD₄/CD₈比值呈明显的负相关(P＜0.01)，与血浆P₂₄抗原则无明显相关关系。结论　血浆HIV病毒载量、CD₄计数及CD₄/CD₈比值是HIV感染临床进程的重要指标；血浆P24抗原检测阳性率对判断疾病临床进展价值不大；病毒培养阳性率与临床发病状况有关，可作为临床发病的辅助指标；CD₈计数与感染时间和发病有相关关系，其意义有待进一步考察。

　　The prognostic value of virology and immunology markers in Chinese HIV-1 infected people　LIN Xudong, XU Lianzhi, SHAO Yiming, et al. National AIDS Reference Laboratory, AIDS Prevention and Control Center, Beijing 100052

　　【Abstract】　Objective　To study the prognostic value of virology and immunology markers in Chinese HIV-1 infected people and their correlation.Methods　We studied 190 HIV infected people/AIDS patients′ samples from China. Plasma viral load, P24 antigen, virus culture, CD₄ positive T lymphocyte(CD₄) count and CD₈ positive T lymphocyte(CD₈) count were tested. Test groups were divided according to clnical staging diagnosis from physicians. The data were analyzed in aspects of their relations with clinical status and correlations among all the above markers.Results　Plasma viral load, CD₄ count and CD₄/CD₈ ratio showed significant difference between asymptomatic stage and symptomatic stages (P＜0.01),also between asymptomatic and AIDS stages(P＜0.001).Virus culture positive rate increased significantly from asymptomatic to symptomatic stage. No significant clinical change was observed associating with P24 antigen positive rate. CD₈ count decreased slightly when AIDS occurred (P＜0.001). Close correaltion was observed between plasme viral load, CD₄ count and CD₄/CD₈ ratio.Conclusion　Viral load, CD₄ count and CD₄/CD₈ ratio are useful indicators to AIDS prognosis and virus culture can be a supplementary marker. p24 antigen detection seems no diagnostic value to diaease progress. The significance of CD₈ change will be further studied.

　　【Key words】　Human acquired immunodeficiency syndrome(AIDS)　　Clinical progress　　Laboratory markers

　　中国自1985年发现第一例艾滋病以来，HIV流行状况越来越严重，近年呈加速上升趋势，按卫生部公布的数字，截至1997年底累计感染总数为8277例，估计感染者人数为20万以上。随着时间推移，越来越多的感染者已发病，部分已死亡。HIV感染者的临床分期、预后及治疗工作就显得越来越重要，与HIV感染病程密切相关的指标检测工作国外已有报道^［1，2］，而我国尚未系统开展。常用的HIV实验室指征有病毒学指标和免疫学指标，包括T淋巴细胞亚群计数、病毒抗原检测、血浆中游离病毒载量检测、病毒培养和表型分析、抗体滴度测定等，我们选用了部分指标，对我国190例感染者进行了实验室指征的检测的研究，以期探讨这些指征对疾病临床进展阶段诊断的意义，并通过对这些指标间的相互关系研究HIV感染者疾病发展阶段及其实验室特征。

　　1　材料和方法

　　1.1　样品来源与处理　来自北京及其他各省HIV感染者/AIDS患者，经抗体检测确证为HIV-1感染者。取抗凝外周血，24小时内进行CD₄、CD₈计数，5小时内分离血浆，-80℃冻存；分离淋巴细胞进行HIV病毒培养。患者感染及临床情况通过问询和临床检查得到。

　　1.2　CD₄和CD₈计数　使用Dynal公司的Dynal Beads T4-T8 Count试剂盒，按说明书要求分离T细胞及其亚群，光学显微镜计数。

　　1.3　HIV病毒载量实验　使用AKZO-NOBEL公司的Nuclisense试剂及配套仪器完成。

　　1.4　血浆P24抗原检测　使用AKZO公司Vironostika HIV-1 antigen Microelisa system试剂。酶标测定仪为ORTHO公司产品。

　　1.5　HIV病毒培养　在P3实验室内通过对患者外周血淋巴细胞与激活的正常人淋巴细胞共培养扩增HIV病毒，通过P24检测确定培养是否阳性。

　　2　结果

　　2.1　临床分组　按照我国现行的HIV感染临床诊断分期标准，由临床医生进行临床分期诊断，按诊断将感染者分为三组，即无症状组、有相关症状组(简称ARC组)、艾滋病发病组(简称发病组)。其中ARC组为临床表现HIV感染相关症但不足以认定发病的感染人群。由图1可见临床分组随感染时间延长而趋向于发病，与疾病病程相吻合。由于无法确切知道感染者感染HIV的准确时间，图中感染时间实际为初次检测到患者感染HIV的时间。三组具体数据为：无症状组1.379年(n=66，δ=0.571)，ARC组1.857年(n=21，δ=0.888)，发病组2.156年(n=45，δ=0.842)。其中发病组与ARC组感染时间经统计学处理无显著性差异(P＞0.05)，无症状组与ARC组(P=0.03)、无症状组与发病组(P=1×10^-6)均存在显著性差异。

图1　各临床分组人群感染HIV-1的时间1：无症状组；2：ARC组；3：AIDS发病组

　　Fig.1　Time of infection occurred in different clinical groups

　　1:Asymptomatic group.2:ARC group. 3:AIDS group

　　2.2　三组实验室指标比较　表1数据经统计学处理后可见发病组与ARC组除病毒载量外其他各项指标均无显著性差异，ARC组病毒载量显著低于发病组(P＜0.05)；ARC组与无症状组相比CD₈计数无显著改变(P=0.487)，而病毒载量显著升高(P＜0.05)，CD₄计数显著降低(P=0.005)，CD₄/CD₈的下降尤其显著(P=1.08×10^-6)，P24抗原阳性率及病毒培养阳性率均无显著改变(P值均大于0.05)；发病组与无症状组相比，病毒载量、CD₄计数和CD₄/CD₈都有显著性差异(P值均小于0.001)，而且CD₈计数也显著下降(P=4.49×10^-5)，虽然作为病毒表达量指标的P24抗原检测阳性率未发现显著改变(P＞0.05)，作为病毒感染性指标的病毒培养阳性率却显著升高(P＜0.05)。见表2。

表1　不同临床状态下的实验室检测指标

　　Tab.1　The of laboratory markers in three clinical groups

表2　各指标组间差异的显著性检验(P值)

　　Tab.2　Significant test of change of markers in different groups (P value)

　　*：t test　#：U test

　　2.3　实验室数据间的相关性　通过对表1数据的进一步处理，我们探讨了各实验室数据间的相关关系。CD₄计数与CD₈计数呈明显的正相关关系(相关系数r=0.367，n=147，显著性检验P＜0.01)，与病毒载量呈明显的负相关(r=-0.524，n=89，P＜0.01)。CD₄/CD₈比值与病毒载量也明显负相关(r=-0.505，n=84，P＜0.01)。CD₈计数与病毒载量无明显的相关关系(r=-0.144，n=83)。在不同P24检测和病毒培养状况的样品中其他实验室指标的差异见表3和表4。

表3　病毒载量、CD₄、CD₈及CD₄/CD₈比值在不同P24状况标本中的差异

　　Tab.3　Data of viral load, CD₄, CD₈ and CD₄/CD₈ in samples of different P24 status

　　表4　病毒载量、CD₄、CD₈及CD₄/CD₈比值在不同病毒培养结果标本中的差异

　　Tab.4　Data of viral load, CD₄, CD₈ and cD₄/CD₈ in samples of different virus culture status

　　P24阳性组的CD₄计数和CD₈计数均明显低于阴性组。病毒载量和CD₄/CD₈比值两组间未发现显著性差异。病毒培养阳性组的CD₄计数明低于阴性组，其他指标间未观察到显著性变化。

　　3　讨论

　　按CDC 1992年的HIV病程分期系统，认为随时间发展，其发病状态是不可逆的，而发病前的HIV相关症状则可能通过治疗回复。在我们的结果中有相关症状的人群无论在时间上还是在实验室指标上都很难与发病状态明确分开，几个指标中只有病毒载量显示出显著的升高；有相关症状的人群与无症状组相比病毒载量、CD₄计数及CD₄/CD₈比值均有明显变化，而CD₈、抗原检测及病毒培养阳性率均未发现明显改变；发病状态与无症状状态则是完全不同的，除P24阳性率外的其他指标均显示非常显著的差异。说明出现相关症状的状态更接近于发病状态。这与此两种状态在临床上很难区分是一致的。

　　CD₄抗原阳性细胞是HIV病毒攻击的主要靶细胞，此类细胞随病程进行而被病毒感染、破坏以至耗竭，导致发病和死亡，外周血CD₄阳性细胞计数被公认为是疾病进程的重要指标，我们的数据表明作为外周血中CD₄阳性细胞的主要成分的CD₄细胞计数与疾病分期密切相关，支持此论点。　　病毒载量数值反应血浆中游离病毒的浓度，是病毒增殖和免疫清除机制共同作用的结果，因而在判定疾病进程和判定临床治疗效果上很有价值，我们的数据证明此指标与症状发生与否(P=0.02)及发病与否P=0.02)及发病与否(P＜0.001)均密切相关，并与CD₄计数明显副相相关(r=0.464，P＜0.001)。有文献认为病毒载量比CD₄计数能更好地指示疾病状况的发展^［3］，从我们的数据来看，不能得到此结论，CD₄计数值在组间的差别甚至较病毒载量更为显著，因此我们认为CD₄计数仍然是一种很好的病程指示指标。

　　P24抗原阳性率在各临床状态之间无明显变化，因而P24抗原测定作为病程指示指标价值不大；而病毒培养阳性率在无症状组和发病组之间明显不同，这提示在发病时病毒的感染状态发生了改变。有文献表明HIV病毒表型在发病状态由非细胞融合型(nonsyncytium-inducing, NSI)变为细胞融合型(syncytium-inducing, SI)^［4，5］。其毒力的升高，可能是导致症状发生的原因之一。这提示在实验室指标中加入对病毒表型的检查是很有意义的^［6］。

　　CD₈计数一般被认在疾病过程中无明显变化，甚至在报道CD₈随疾病过程而升高^［7］，我们的数据表明CD₈与CD₄计数明显正相关，且CD₈计数在发病状态明显降低。表1中显示的CD₄/CD₈比值较CD₄计数在临床分组间显示出更明显的差异，并不能表明CD₈值 在上升，可能原因是CD₈值的加入减小了个体间淋巴细胞总数的差异。

　　参考文献

　　1　Hellors J W. Plasma viral load and CD₄ lymphocyte as prognostic markers of HIV-1 infection. Ann Inter Med, 1997,126(12):946-954.

　　2　Hammer S M. Advances in antiretroviral therapy and viral load monitoring. AIDS, 1996,10(supply 3):s1-s11.

　　3　Iuliano R, Forastieri G, Brizzi M, et al. Correlation between plasma HIV-1 RNA levels and the rate of immunologic decline. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol, 1997,14(5):408-414.

　　4　Balotta C, Colombo M C, Colucci G, et al. Plasma viremia and virus phenotype are correlated with disease progression in vertically human immunodeficiency virus type 1-infected children. Pediatr Infect Dis J, 1997,16(2):205-211.

　　5　Verhofstede C, Reniers S, Van Wanzeele F, et al. Evaluation of proviral copy number and plasma RNA level as early indicators of progression in HIV-1 infection: correlation with virological and immunologycal narkers of disease. AIDS, 1994,8(10):1421-1427.

　　6　Katzenstein D A. Viral phenotype and genotypes as markers in clinical trails. J AIDS Hum Retroviral, 1995,10(supply 2):S25-S34.

　　7　Fuchs M, Stadler B M, Malinverni R, et al. Relationship between T subset and clinical aspects of HIV associated diseases. Schweiz Med Wochenschr, 1991,121(3):57-66.