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原因不明不孕患者外周血细胞肿瘤坏死因子α表达的研究
中国免疫学杂志 2000年第10期第16卷 生殖免疫学
作者：贾莉婷 李雅丽 杨淑玲 耿琳琳 任芬若 刘东峰 韩书心 张唏
单位：李雅丽，女41岁，副主任医师，从事妇产科临床工作；贾莉婷（河南医科大学第三附属医院，郑州450052）；李雅丽（河南省人民医院，郑州450003）；杨淑玲（河南医科大学第三附属医院，郑州450052）；耿琳琳（河南医科大学第三附属医院，郑州450052）
中国图书分类号 R711.6
不孕症的病因非常复杂，就女方而言，除与解剖、遗传、内分泌及感染因素有关外，还有10%～20%的患者原因不明。在此类患者中，免疫因素占20%，起着不可忽视的作用［1］，体液免疫中研究最多的是抗精子抗体(AsAb)，大量的动物及临床试验已证实了AsAb导致不孕的病理机制。细胞免疫对于生殖异常的作用逐渐引起学者们的关注，肿瘤坏死因子α(TNFα)水平的高低可以反映细胞免疫的功能状态，但TNFα与AsAb的关系尚不清楚，国内少见这方面的报道，因此本研究选择原因不明不孕患者，以ELISA法测患者血清AsAb，以RIA法测其外周血细胞培养上清TNFα，并以正常妇女作为对照，旨在探讨TNFα在免疫性不孕发病中的作用。
1 材料与方法
1.1 检测对象 原因不明不孕患者47例，年龄22～34岁(26.53±2.57)，不孕史2～10年，平均4年；体检正常育龄非孕女性15名，年龄22～35岁(26.33±2.44)。
1.2 标本采集与培养 所有研究对象均取晨8时空腹静脉血，其中3 ml分离血清置-45℃冻存待测AsAb；根据白细胞计数，取0.2～0.3 ml加肝素抗凝，注入分装好的含1.8 ml RPMI1640全培养液中，白细胞的终浓度约为1×109 L-1，置37℃隔水式电热恒温箱中无菌培养50 h，2 000 r/min离心5 min取上清液，-45℃冻存待测TNFα。
2 结果
原因不明不孕组血清AsAb阳性率为29.79%，明显高于正常对照组的6.67%(P＜0.05)。原因不明不孕组外周血培养上清TNFα含量为(1.074±0.431) μg/L，明显高于正常对照组的(0.549±0.403) μg/L(P＜0.001)。AsAb(+)组的TNFα含量为(1.302±0.468) μg/L，明显高于AsAb(-)组的(0.670±0.272) μg/L(P＜0.001)。外周血细胞培养上清TNFα含量与血清AsAb水平呈正相关(r=0.648 6,P＜0.001)。
3 讨论
TNFα是一种主要由激活的单核巨噬细胞分泌的具有多种生物学活性的重要细胞因子。1987年Hill等学者研究了6种细胞因子对精子的作用，发现TNFα和γ-干扰素能明显抑制精子的活动度，同时TNFα有促进B细胞合成抗体的作用，试验证明：混合淋巴细胞培养及含刀豆素A刺激的淋巴细胞培养上清液与精子孵育1～2 h能明显抑制精子的活动能力，之后在鼠卵穿透试验中发现TNFα是影响精子穿透卵细胞的主要因子\+\{［2］\}。
正常情况下精子对于女性免疫系统虽为异物，但体内不产生AsAb，只有机体免疫功能失调时，少数人体内才产生AsAb。AsAb可以通过介导补体、激活巨噬细胞和T细胞产生一系列细胞因子，而细胞因子多数可通过免疫增强作用促进其对精子抗原的免疫反应，与AsAb相互作用，彼此诱导，协同抗生殖。
本研究充分说明了AsAb是导致不明原因不孕症的重要免疫因素。不孕患者体内的细胞免疫功能与正常对照组相比处于异常增强状态，可能由于抗原刺激导致机体免疫调节功能紊乱所致。有学者亦表明在原因不明不孕患者宫颈粘液中发现异常增多的激活的淋巴细胞、巨噬细胞及其产生的细胞因子［3］。结果表明对精子敏感的免疫细胞可以产生并释放TNFα，而TNFα又反过来促进B淋巴细胞分泌产生AsAb，两者协同对生殖过程的影响在原因不明不孕的发生机制中起重要作用，更进一步说明TNFα与AsAb之间是相互影响、相互作用的。
上述结果表明，TNFα对于AsAb产生着至关重要的作用，因为正常精子并不激活T淋巴细胞，T辅助细胞(TH)并不识别被巨噬细胞(Mφ)吞噬表达的精子抗原，但如果精子表面结合有抗体或细菌/病毒等就会激活细胞毒性T细胞(TH)，并诱导产生TNFα而促进Mφ表达MHC-Ⅱ抗原，此时吞噬了精子的Mφ表面同时表达精子抗原和MHC-Ⅱ分子，TH便可识别精子抗原，进而刺激B淋巴细胞，产生特异性AsAb，激发免疫应答反应，所以，TNFα与AsAb是相互诱导、相互促进的，在不孕发生机制中，共同引起、增强对精子抗原的免疫反应。
本研究为河南省科技攻关项目(编号：961200437)
作者简介：贾莉婷，女，41岁，副主任技师，主要研究临床免疫学；
作者单位：任芬若（河南医科大学第三附属医院，郑州450052）
刘东峰（河南医科大学第三附属医院，郑州450052）
韩书心（河南医科大学第三附属医院，郑州450052）
张唏（河南省省直一门诊部，郑州 450000）
参考文献
1，Collins J A, Crosignani P G. Unexplained infertility: a review of diagnosis, prognosis, treatment efficacy and management. Int J Gynecol Obstet, 1992； 39:267
2，Hill J A, Cohen J, Anderson D J. The effects of lymphokines and monokines on human sperm fertilizing ability in the zonafree hamster egg penetration test. Am J Obstet Gynecol, 1989; 160:1154
3，Naz R K, Bulter A. Interleukin-6 and interlukin-8 levels in sera and cervical mucus of fertile, idiopathic infertile, and immunoinfertile women: implication in infertility. Am J Reprod lmmunol, 1996； 35:534
［收稿1999-06-17，二次修回2000-03-30］