热休克蛋白70与AS发生的相关性研究
南京医科大学博士论文答辩
南京医科大学动脉硬化研究中心
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李 晓 宇
材料和方法
BCA Protein Assay Reagent Kit（Pierce）
ECL发光试剂盒（Amersham Biosciences）
鼠抗HSP70单克隆抗体（博士德）
兔抗HSP70多克隆抗体（博士德）
β-actin单克隆抗体（sigma）
HRP标记二抗（Santa Cruz）
HSP70寡核苷酸探针原位杂交试剂盒 （博士德）
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复制动物模型－血脂
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复制动物模型－体重
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复制动物模型－肝脏脂质
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正常组
不敏感组
敏感组
造型动物胸主动脉
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正常组
敏感组
不敏感组
造型动物肝脏
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a :高脂组F182扩增曲线；b :正常组F182扩增曲线；c : 高脂组β-actin扩增曲线；d : 正常组β-actin扩增曲线；e:阴性对照。Cta = 14.82; CTb = 20.58 ; CTc = 22.15 ; CTd = 24.24。高脂组比率= 22.15/14.82=1.49 ; 正常组比率= 24.24/20.58 = 1.18。高脂组比率>正常组比率, mRNA 表达水平上,高脂组高于正常组。
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HSP70原位杂交
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HSP70原位杂交
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ELISA
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Western检测造型动物肝脏HSP70表达
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Western检测LDL，oxLDL刺激HepG2细胞后HSP70表达
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冠心病患者外周血抗HSP70抗体的存在提示它可能参与了AS的发生发展；但Pockley等的研究提示HSP70可以减轻AS病变。HSP70在AS的发生中究竟是起促进作用还是保护作用，目前尚有争议。
最近的研究表明最近的研究表明高脂血症病人血清抗HSP70抗体滴度和饮食中的脂质含量相关。?Dybdahl等发现了24名急性心肌梗塞患者血液HSP70水平均显著高于对照组，其浓度与心肌损害程度相关。
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Dutta等对LDLR-/-Apobec1-/-小鼠的研究显示，高脂饲料引起小鼠肝脏HSP70 mRNA表达明显增强。
Laurent等用两种致AS饲料高胆固醇和高胆汁酸复制AS小鼠模型，研究其肝脏基因表达谱，发现食饵性高胆固醇血症会引起肝脏急性炎症；而高胆汁酸血症主要导致细胞外基质沉积，发生肝纤维化。
本研究中复制的家兔AS模型也发现血清淀粉样蛋白都增高，与此结果一致。
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我们的研究发现，高胆固醇血症引起的肝脏HSP70表达增强和血清HSP70含量增高与AS病变程度呈正相关。
肝脏HSP70表达增强的可能机制：ox-LDL刺激肝细胞；脂质沉积引起的细胞缺氧。
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本研究提示，肝细胞表达增强的HSP70可能会释放到循环血中，参与高胆固醇血症引起的全身性炎症反应和免疫应答，促进AS的发生。肝脏的应激反应和炎症反应释放的炎症因子也可能进入血液循环，参与全身性炎症反应，促进AS的发生发展。
研究小结
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喂饲高脂饮食后，高脂组家兔肝脏HSP70核酸和蛋白表达均明显增加，血清HSP70变化趋势相同。体外实验发现ox-LDL而非LDL可刺激HepG2 HSP70的蛋白表达增强。
谢 谢！