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【摘要】 目的 研究不同浓度血清甘油三酯（TG）对高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定的影响，寻找更适合基层实验室测定HDL-C的方法。 方法 确定TG＜1.69mmol/L30例及高血脂标本103例，采用全自动生化分析仪检测TG及HDL-C，并稀释高甘油三酯标本，采用直接法(过氧化氢酶清除法)及沉淀法进一步检测HDL-C，2种方法检测结果进行比较。 结果 在TG＜1.69mmol/及在1.69～4.00mmol/L时，2种方法测定HDL-C结果之间无差异（P＞0.05）；在TG＞4.01mmol/L时，2种方法之间差异有显著性（P＜0.05）。稀释标本检测，在TG＞6.00mmol/L时，2种方法之间HDL-C差异有显著性（P＜0.05）；同一方法检测标本稀释前后HDL-C结果比较，在TG各浓度值直接法均无差异，在TG＞4.00mmol/L时，沉淀法有差异。 结论 检测高TG标本HDL-C，直接法和沉淀法之间有显著差异，有条件的实验室应选择采用过氧化氢酶清除原理的直接法检测高TG标本。如采用沉淀法，应注意高TG对测定结果的影响。
【关键词】 甘油三酯 高密度脂蛋白胆固醇
Observation on the effect of high concentration of serum triglyceride on the detection of high density ipoprotein cholesterol by various mehtods.
LAI Xiong, YU An-song.
(Zhanjiang Municipal Second People’s Hospital, Zhanjiang 524003, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To investiate the effect of different concentrations of serum triglyceride (TG) on the determination of high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and look for a mehtods suitable for determinatio nof HDL-C at grass-roots laboratory. Methods TG、HDL-C in serum were determined by autobiochemical analyzer, and dilute serum specimen of high concentrations triglyceride specimen, and HDL-C was further detected by the methods of direct and precipitation, and the results of HDL-C were compared. Results There no difference was observed in determination of HDL-C between the 2 groups and the concentrations of serum TG was in the ranges of 1.69～4.00mmol/L. there significant difference was observed in determination of HDL-C as TG concentration was higher than 4.0mmol/L (P＜0.05). In determiantion of HDL-C befor and afer dilution of serum specimen significant differences were noticed as TG concentrations were higher than 6.00mmol/L; when HDL-C of diluted serum specimen was determined by identical methods, there was no difference among all with the methods of direct, there was difference as TG was higher than 4.01mmol/L with precipitation. Conclusion Significant differences in indetermination of concentration ofHDL-C with high TG level by precipitation and directly automatic methods have been observed,suggesting that HDL-C in the sera with high TG level should be determined by catalase HDL-C assay of directly automatic determination method.
Key words：Triglyceride (TG); High-density lipoprotein cholesterol (HDL-C)
相关研究已经证实，动脉粥样硬化、冠心病的发生率与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平呈负相关。美国国家胆固醇教育计划（NECP）把HDL-C＜1.04mmol/L作为冠心病的主要危险因素，而HDL-C＞1.56mmol/L被认为是负危险因，具有保护性。国内常规实验室直接分离测定HDL-C 的方法已历经电泳法、化学分离法及目前广泛使用的直接法，直接法根据反应原理分为选择性抑制法、PEG 修饰酶法及清除法。张葵［1］应用选择性抑制法研究发现，无论是直接法或沉淀法，对高甘油三酯（TG）标本测定结果都有影响。本研究应用直接法中的过氧化氢酶清除法原理及沉淀法（PTA-Mg2+）分别测定高TG血清标本HDL-C，观察高TG对2种方法测定HDL-C的影响，为临床制定诊治方案提供帮助。
1 材料与方法
1．1 标本来源 收集住院和门诊患者高TG标本，TG＜1.69mmol/L 30例，TG1.69～4.00mmol/L 35例，TG4.01～6.00mmol/L 37例，TG＞6.00mmol/L 31例，其中男85例，女50例，年龄19～87岁。所有患者空腹12h于次日清晨静脉采血2ml，及时分离血清待测。
1．2 仪器与试剂 贝克曼CX5全自动生化分析仪，直接法试剂购自上海科华生物工程股份有限公司，沉淀法试剂为宁波慈城试剂厂生产的磷钨酸镁法（PTA-Mg2+）试剂盒。
1．3 检测方法 血清TG采用酶法。直接法测定HDL-C应用过氧化氢酶清除原理，两点速率连续检测法测定。沉淀法：血清0.2ml+沉淀剂0.2ml，充分混匀，室温放置10min，1500r/min离心10min，吸取上清液上机检测。标本稀释：用生理盐水倍比稀释标本，稀释至测定结果<1.69mmol/L，最后结果乘以稀释倍数。
1．4 统计学处理 应用SPSS10.0 for windows 统计软件，两组间比较采用配对t检验。
2 结果
2．1 不同浓度TG标本2种方法测定HDL-C结果比较 结果显示，在TG＜4.00mmol/L时，两种方法测定结果无差异（P＞0.05）。在TG＞4.00mmol/L时，2种方法测定结果比较差异呈显著性（P＜0.05），沉淀法高于直接法。见表1。
表1 不同浓度TG标本2种方法测定HDL-C结果比较（略）
注： P＜0.05,#P>0.05。
2．2 不同浓度TG标本稀释后2种方法测定HDL-C结果比较 在TG＜6.00mmol/L时，2种方法测定稀释标本HDL-C结果比较无差异（P＞0.05）。在TG＞6.00mmol/L时，两者比较差异呈显著性（P＜0.05），沉淀法高于直接法。见表2。
表2 不同浓度TG标本稀释后2种方法测定HDL-C结果比较（略）
注： P＜0.05,#P>0.05。
2．3 不同浓度TG标本稀释前后两种方法测定HDL-C测定结果比较 直接法测定结果无差异（P＞0.05），在TG＞4.00mmol/L时，沉淀法标本稀释前后测定结果比较差异显著（P＜0.05）。见表3。
表3 不同浓度TG标本稀释前后2种方法测定HDL-C测定结果比较（略）
注： P＜0.05,#P>0.05。
3 讨论
中华医学会检验分会在国内推荐使用PTA-Mg2+沉淀剂测定HDL-C［2］，由于其操作复杂不易自动化，现已逐渐被直接法取代。同是直接法，不同的厂家配方各异，本研究采用直接法的过氧化氢清除原理，即在试剂A中具有特异选择性强离子缓冲液，其作用于血清中的CM、VLDL及LDL，使其所含的胆固醇暴露在胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的催化反应下生成H2O2，H2O2被过氧化氢酶分解为H2O和O2而被清除。试剂B中的叠氮钠抑制了过氧化氢酶活性，表面活性剂使HDL-C颗粒中的胆固醇暴露，并分别与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶及过氧化氢酶等试剂发生反应生成醌类化合物，在波长600nm处连续检测。本研究显示，当TG＜4.00mmol/L时，2种方法测定HDL-C结果无明显差异，而TG＞4.01mmol/L时，2种方法之间存在不同程度差异，与Harris［3］等报道结果基本一致。高TG标本稀释后,2种方法检测结果在标本TG＞6.00mmol/L时呈显差异。比较同一方法检测稀释前后标本结果，直接法均无差异,沉淀法在TG 1.69～4.00mmol/L标本稀释前后结果无差异，但在TG＞4.01mmol/L时前后呈显著差异。TG阻碍不可溶脂蛋白的离心沉淀致使上清液混浊，导致HDL-C假性升高，混浊的上清液可通过超速离心除去，但一般常规实验室难以进行。也可通过稀释标本减低溶液的TG密度，但本研究显示，在TG＞6.00mmol/L，标本稀释前后沉淀法测定结果比较呈显著差异，显示其不能完全沉淀。本研究直接法应用过氧化氢酶清除原理，两点速率法连续检测，一定程度上能减少高TG对测定结果的影响。本研究亦显示标本稀释前后直接法测定结果比较无差异。因此，对高TG标本，有条件的实验室应选择直接法且是过氧化氢酶清除原理，从而为临床提供准确的HDL-C检测结果。如采用沉淀法，应注意高TG对测定结果的影响。
【参考文献】
［1］ 张葵，王丽，张欣，等.高脂血对不同方法测定血清高密度脂蛋白胆固醇的影响［J］.临床检验杂志，2004，22（6）：429～431.
［2］ 中华医学会检验学会血脂测定推荐方法.四、血清高密度脂蛋白胆固醇测定法(草案)［J］.中华医学检验杂志,1995,18 (5)∶311～312.
［3］ Harris N, Galpachian V, Thomas J, et al. These generation of high-density lipoprotein cholesterol assays compared with ultracentrifugation/dextran sufate·Mg2+ method［J］. Clin Chem,1997,43(5):816～823.
作者单位：湛江市第二人民医院检验科,广东 湛江 524003; 广东海洋大学医院,广东 湛江 524088.