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【摘要】 目的 CD45RA是CD45分子5种异构体之一，选择性地表达在CD8 + TC、NK细胞、B细胞以及肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）等表面，在细胞信号传导中具有重要调节作用，本文旨在探讨其在慢性肾衰时的表达情况。方法 应用流式细胞仪（FCM）检测了慢性肾衰（CRF）患者和正常对照组CD3、CD4、CD8和CD45RA的表达。结果 显示CRF患者CD4 + 细胞百分率显著降低（P<0.01），CD45RA + 细胞百分率亦明显降低（P<0.05）。结论 这可能与CRF患者免疫功能尤其是细胞免疫功能降低有重要关系。
关键词 慢性肾衰 CD4 CD45RA 表达
Detection of CD4and CD45RA on T lymphocyte surface and its significane in CRF
Xi Yunping，Qian Cunrong，Liu Heping，et al.
406th Hospital of PLA，L shun116041.
【Abstract】 Objective CD45RA is one of the five isoforms of CD45molecule.It expresses selectivly on CD8 + TC，NK cell，B cell and tumor infiltrating lymphocyte（TIL）.CD45RA has an important regulating function in cellular signal transduction.Methods In order to explore the relation between CD45RA and chronic renal failures（CRF），we have analyzed the expression of CD3，CD4，CD8and CD45RA in CRF patients and normal people by using FMC.Results The results indicate that C
D4and CD45RA expression is decreased signifcantly in CRF patients（P<0.01or P<0.05）.Conclusion The results suggested that the immune function（especially cellular immune funcˉtion）is decreased.
Key words detection CD4 CD45RA Tlymphocyte significance CRF
慢性肾功能衰竭患者简称肾衰（Chronic Renal Failure，CRF），是一种常见的严重临床症候群，预后不良。CRF是在各种慢性肾脏疾病的基础上，由于肾单位严重受损，缓慢出现的肾功能减退而致不可逆转的肾衰，同时往往伴有免疫功能的全面减退。本文应用流式细胞仪（FCM）检测了CD3、CD4、CD8和CD45RA在慢性肾衰中的表达，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 检测对象 CRF35例，男29例，女6例，平均年龄45.70±13.33岁。其中27例继发于肾小球肾炎，8例继发于肾盂肾炎。正常对照30例，男19例，女11例，平均年龄35.86±7.48岁，为体检健康者。
1.2 材料
1.2.1 动物 BALB/C小鼠，4～6周龄，雌雄不拘，由中国科学院上海动物中心提供。
1.2.2 细胞 2H4杂交瘤细胞（分泌CD45RA单抗），系从ATCC（美国模式菌种收集中心）购得。
1.2.3 培养基 RPMI-1640（GIBCO）完全培养液含2mmol/L谷氨酰胺，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml，10%新生小牛血清。
1.2.4 CD45RA单克隆抗体制备 2H4细胞复苏后，将培养好的杂交瘤细胞（1～2）×10 6 /ml注入预先用降植烷处理过的小鼠腹腔中（0.5ml）。2周左右采集腹水，3，000rpm离心15min，收集上清。先用饱和硫酸铵（ASA）盐析法进行粗提，然后将粗提后的单克隆抗体样品用20mmol/L NaCl、pH7.820mmol/L的Tris-HCl缓冲液透析，其间更换3次以上透析液，至钠氏试剂检测无黄色物形成为止 ［1］ 。
1.2.5 CD3、CD4和CD8单克隆抗体 系由华美生物工程公司提供。
1.3 FCM测定CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 和CD45RA + 细胞取受检者肝素抗凝血100μl，抗CD3、CD4、CD8和CD45RA单抗各10μl。32℃孵箱孵育30min，经常摇动。每管加0.02mol/L pH7.4的PBS4ml，1，000rpm离心3min，洗涤2次。然后加入羊抗鼠IgG荧光（FITC）标记抗血清，每管各加50μl（华美生物工程公司提供），32℃孵育30min。每管滴加固定液（0.8%戊二醛）2滴，以Epics-XL FCM（Coulter）检测。同时作阴性对照。
2 结果
见表1。
3 讨论
CRF是一种常见的严重临床症候群，预后不良，病死率较高。CRF是在各种慢性肾脏疾病基础上，由于肾单位严重受损，缓慢出现的肾功能减退而致不可逆转的肾衰。同时往往伴有免疫功能的全面减退。CRF的发病机制十分复杂，人们曾提出“尿毒症毒素学说”，“健存肾单位学说”，“矫枉失衡学说”、“肾小球高滤过学说”、“脂质代谢紊乱学说”和“肾小管高代谢学说”等。其中“尿毒症毒素学说”较早得到人们认识并一直受到重视。目前已知尿毒症患者体液内约有20余种尿毒症毒性物质，可分为小分子（分子量<500道尔顿）、中分子（分子量500～3，000道尔顿）和大分子（分 子量>3，000道尔顿）三类，其中中分子毒性物质可引起机体的免疫功能抑制。
表1 CRF组和正常组CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 和CD45RA + 细胞百分率（%）的比较 (略) 注:与对照组比较， △ P<0.05， ˇ P<0.01 中分子毒性物质可能包括:（1）高浓度正常代谢产物;（2）结构正常，浓度增高的激素;（3）细胞代谢紊乱产生的多肽;（4）细胞或细菌裂解产物。高浓度中分子物质可引起周围神经病变、尿毒症脑病、红细胞生成抑制、脂蛋白酶活性抑制、抗体生成抑制、细胞免疫功能低下等 ［2］ 。
为了探讨CRF患者细胞免疫功能状况，本文应用FCM检测了CRF组和正常对照组CD3、CD4、CD8和CD45RA的表达。结果显示CRF患者CD4 + 细胞百分率显著降低（P<0.01），CD45RA + 细胞百分率亦明显降低（P<0.05）。而CD3 + 细胞和CD8 + 细胞百分率则差异无显著性。
CD4分子为细胞表面单链糖蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，CD4可与MHCⅡ类抗原结合，不仅可增强T淋巴细胞与APC或靶细胞结合的程度，而且与刺激信号的传递有关 ［3］ 。CD4的胞浆区与蛋白酪氨酸激酶P561ck相连，对T细胞信号传导起重要作用 ［4］ 。CD4分子主要分布于诱导-辅助性T细胞（Tind/Th）、迟发型超敏反应T细胞（TDTH）和抗抑制性T细胞（TCS）上。CD4 + CD8 - T细胞的主要功能是以其分泌细胞因子来增强和扩大免疫应答过程的 ［5］ 。在CRF中CD4分子表达降低，这可能与CRF免疫功能尤其是细胞免疫功能降低有重要关系。
Tind/Th细胞的主要功能之一是分泌细胞因子，包括抗原特异淋巴因子及抗原非特异淋巴因子（如IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IFN-γ、GM-CSF等）。后一类因子对免疫应答具有广泛的正调节作用，能激活Tc及B细胞，使它们分化为相应的效应细胞。在CRF时，CD4 + 细胞百分率减少亦包括了Tind/Th细胞的减少，这也可能是其细胞免疫功能 减低的另一个重要因素。
CD45RA是CD45分子五种异构体之一，选择性地表达在T细胞、NK细胞、B细胞以及肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）等表面，在细胞信号传导及淋巴细胞效应中具有重要作用 ［6］ 。现已证实，CD45分子参与细胞的活化和生长调节，抗原诱导的T细胞克隆增殖有赖于CD45分子的表达 ［7］ 。本文测定了35例CRF患者CD45RA + 百分率较正常组明显降低（P<0.05），这可能是其细胞免疫功能降低的又一重要原因。至于CRF引起CD4和CD45RA表达降低的确切机制，以及二者之间的相互关系，有待进一步研究证实。
参考文献
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（收稿日期:2004-02-23） （编辑黄 河）
作者单位:116041中国人民解放军第406医院
200433上海第二军医大学长征医院