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【摘要】 目的 探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因在食管鳞状细胞癌及癌旁正常组织中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学S-P法对64例食管鳞状细胞癌组织标本及64例癌旁正常组织进行FHIT基因的表达水平检测，分析其与临床病理分期、细胞分化程度及淋巴结转移等的关系。 结果 食管鳞状细胞癌组织中FHIT基因阳性表达率为28.1%（18/64），而癌旁正常组织中阳性表达率为87.5%（56/64），二者差异有显著性（χ 2 =46.3，P<0.01），FHIT基因表达下降与患者PTNM分期、细胞分化程度、淋巴结转移、性别、年龄、吸烟史、饮酒史及病史长短均无明显关系（P>0.05）。 结论 FHIT基因的表达下降可能与食管鳞状细胞癌的发生、发展相关，与临床病理分期、细胞分化程度及淋巴结转移无关。
【关键词】 食管鳞状细胞癌;脆性组氨酸三联体;免疫组织化学
脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad，FHIT）基因位于3p14.2，是Ohta等在1996年克隆确定的一个候选抑癌基因，人们已在多种人类原发肿瘤组织和细胞系中发现FHIT基因的缺失，有关食管癌组织中FHIT蛋白表达的研究，在国内外较少见。本实验应用免疫组织化学S-P法对64例食管鳞状细胞癌组织标本及64例癌旁正常组织进行了FHIT基因的表达水平检测，以探讨FHIT基因表达在食管癌发生中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源 2000年1月～2002年12月间淄博市中心医院手术切除的经病理证实的食管鳞状细胞癌标本，共64例，男56例，女8例;最小年龄46岁，最大年龄76岁，平均年龄60.4岁;均无术前放、化疗治疗史，经常规福尔马林固定，石蜡包埋，3μm连续切片。根据UICC1987年修订的食管癌分期标准:ⅡA期31例，ⅡB期1例，Ⅲ期32例。其中，高分化癌13例，中分化癌40例，低分化癌11例;有淋巴结转移33例，无淋巴结转移31例;有吸烟嗜好者39例，无吸烟嗜好者25例;有饮酒嗜好者41例，无饮酒嗜好者23例;主诉:病史≥3个月者32例，病史<3个月者32例。
1.2 主要试剂及仪器 主要试剂:兔抗人FHIT多克隆抗体一抗工作液、SP9000通用型免疫组化试剂盒、DAB均购自北京中山生物技术有限公司。主要仪器:德国LEICA RM2315型切片机、LEICA TP1020型脱水机、常州郊区中成电子仪器厂的病理组织漂烘处理仪。
1.3 方法 应用免疫组织化学S-P法对64例食管鳞状细胞癌组织标本及64例癌旁正常组织进行了FHIT基因的表达水平检测。
1.4 结果评定 FHIT基因表达产物定位于胞浆，故FHIT基因表达阳性者细胞浆显示棕黄色颗粒。每张切片在400倍显微镜下选定10个视野，计算阳性细胞百分数。阳性细胞百分数<10%为染色阴性（-）;阳性细胞百分数为10%～25%，为染色弱阳性（±）;阳性细胞百分数为25%～50%，为染色阳性（+）;阳性细胞百分数>50%，为染色强阳性（++）。计算阳性表达率时，将±、+、++均记为阳性表达。以已知的阳性乳腺组织切片（中山公司提供）作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.5 统计学方法 用χ 2 检验法。
2 结果
2.1 FHIT基因在食管鳞状细胞癌及癌旁正常上皮组织中的表达 64例肿瘤组织中，FHIT阳性表达为18例，其中阳性4例，阳性率为28.1%，而癌旁正常上皮组织中，FHIT阳性表达为56例，其中强阳性3例，阳性32例，阳性率为87.5%，两组之间差异有显著性（χ 2 =46.3，P<0.01）。
2.2 FHIT表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系 见表1。结果显示FHIT基因的表达与性别、病史长短、吸烟、饮酒嗜好无关（P>0.05），与食管癌的病理分级、PTNM分期、淋巴结转移无关（P>0.05）。
表1 FHIT表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系（略）
3 讨论
FHIT基因是第一个将脆性位点与肿瘤联系的抑癌基因，它是组氨酸三联体（histidine triad，HIT）基因家族成员之一。Fhit是一个典型的二核苷酸5'-5'''-p1，p3三磷酸（Ap3A）水解酶（EC3.6.1.29），ApnA又是参与细胞内增殖和凋亡信号传导的重要因子。Fhit功能失活可能导致Ap3A水平提高，刺激、加强生长信号传导途径或阻断了生长信号抑制途径、细胞凋亡途径而影响肿瘤发生。Ishii等 ［1］ 总结了1948例FHIT基因在原发肿瘤组织中的表达情况，有1162例表达缺失或低表达，占60%，认为FHIT基因至少在一部分恶性肿瘤中的生物学行为是一种典型的抑癌基因。本组资料是采用癌组织与自身正常食管组织比较来确定食管癌组织中是否有FHIT基因的表达下降，结果显示FHIT基因在食管鳞状细胞癌组织中，阳性表达率为28.1%，而癌旁正常上皮组织中，阳性表达率为87.5%，两组之间差异有显著性，提示FHIT基因的表达下降在食管鳞状细胞癌的发生、演化过程中可能具有重要的作用。
Mori等 ［2］ 认为FHIT/FRA3B位点是易受环境因素影响而发生变化的区域，FHIT基因的表达缺失可能是人类食管癌进展中的一个早期事件，也可能在一些处于致癌环境下的正常鳞状上皮中出现，认为有烟酒嗜好的患者比无烟酒嗜好的患者FHIT基因有明显高频率的缺失;而Shimada ［3］ 等应用免疫组化的方法评价了149例食管鳞状细胞癌患者中FHIT基因对临床的影响，认为FHIT蛋白表达缺失与食管鳞癌的发生、发展有关，但与患者的预后及吸烟史无关。
本组实验观察了FHIT基因表达与吸烟、饮酒习惯的关系，结果FHIT基因表达减低与吸烟、饮酒史无关（P>0.05），与Shimada等的研究结果一致。关于性别、病史长短的影响，本组实验亦显示FHIT基因的表达与性别、病史长短无关（P>0.05）。
Kitamura等 ［4］ 通过免疫组化的方法研究了FHIT基因在75例食管鳞状细胞癌石蜡标本中以及在侵袭性癌、原位癌和异常增生组织中的表达，结果随着病理组织学变化严重性的增加，FHIT表达呈进行性减少或缺失。然而，FHIT表达与临床病理结果如癌分期、淋巴结转移或总生存率之间无明显相关。本组实验中观察了FHIT表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系，结果显示FHIT基因的表达与食管癌的病理分级、P-TNM分期、淋巴结转移无关（P>0.05），与Kitamura等的研究结果一致。Michael等 ［5］ 用RT-PCR的方法研究FHIT基因在正常食管、Barrett's癌前病变、食管腺癌中的表达，结果在食管腺癌中FHIT和FRA3B亦发生高频率的缺失，表明FHIT表达异常在食管癌发生的早期是个共同事件。故检测FHIT在癌前病变及癌组织中的免疫组化表达，可以为我们提供重要的诊断和预后信息。 在FHIT基因与食管癌预后的关系上，国外有关报道还较少，Shimada ［3］和Kitamura ［4］ 均认为FHIT蛋白表达减低与患者的预后无关。
Ishii等 ［6］ 将携带FHIT基因的病毒载体转导入食管癌细胞系，结果显示FHIT载体转导后能抑制食管癌细胞的生长。Ji ［7］ 等用裸鼠进行的实验，结果提示腺病毒载体—Ad-FHIT作为一种抗肿瘤制剂应用的可能性。这些发现表明，利用FHIT基因的转导治疗很可能对临床上癌症的治疗有益。
综上所述，FHIT基因的表达下降可能与食管鳞状细胞癌的发生、发展相关，与临床病理分期、细胞分化程度、淋巴结转移、性别、病史长短、吸烟及饮酒嗜好无关。作为与食管癌发生相关的候选抑癌基因，其在诊断及癌症防治方面的价值有待于我们更深入的研究。
【参考文献】
1 Ishii H，Dumon KR，Vecchione A，et al.Potential cancer therapywith the fragile histidine triad gene:review of the preclinical studies.JA-MA，2001，286（19）:2441-2449.
2 Mori M，Mimori K，Shiraishi T，et al.Altered expression of Fhit in carcinoma and precarcinomatous lesions of the esophagus.Cancer Res，2000，60（5）:1177.
3 Shimada Y，Sato F，Watanabe G，et al.Loss of fragile histidine triad gene expression is associated with progression of esophageal squamous cell carcinoma，but not with the patient's prognosis and smoking histo-ry.Cancer，2000，89（1）:5-11.
4 Kitamura A，Yashima K，Okamoto，et al.Reduced Fhit expression oc-curs in the early stage of esophageal tumorigenesis:no correlation with p53expression and apoptosis.Oncology，2001，61（3）:205-211.
5 Michael D，Beer DG，Wilke CW，et al.Frequent deletions of FHIT and FRA3B in Barrett's metaplasia and esophageal adenocarcinomas.Oncogene，1997，15（14）:1653-1659.
6 shii H，Dumon KR，Vecchione A，et al.Effect of adenoviral transduc-tion of the fragile histidine triad gene into esophageal cancer cells.Can-cer Res，2001，61（4）:1578-1584.
7 Ji L，Fang B，Yen N，et al.Induction of apoptosis and inhibition of tu-morigenicity and tumor growth by adenovirus vactor mediated fragile his-tiding triad（FHIT）gene overexpression.Cancer Res，1999，59（14）:3333-3339.
（编辑:新 竹）
作者单位:255000山东省淄博市中心医院心胸外科
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