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尖锐湿疣患者外周血T淋巴细胞亚群与局部细胞 免疫功能的相关性研究 (pdf)
［摘要］ 目的 研究尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）患者外周血T细胞亚群（CD4+、CD8+）及皮损局部T细胞亚群（CD4+、CD8+）的变化及二者的相关性。
方法 应用流式细胞仪检测42例CA患者及30例正常对照者外周血T细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）的百分比；同时用免疫组织化学S-P法对尖锐湿疣患者皮损的表、真皮T细胞亚群进行测定。
结果 CA组外周血CD4+T细胞表达率（25.21±5.77）%明显低于正常对照组（35.05±3.06）%，CD8+T细胞表达率（39.34±7.46）%，显著高于正常对照组（26.39±2.32）%，二者均具有非常显著性差异（P＜0.01），CD4+/CD8+比值患者组（0.67±0.26）显著低于正常对照组（1.35±0.19）（P＜0.01）；且CA组真皮每高倍视野中CD4+T细胞表达（185.39±31.69）明显高于正常对照组CD4+T细胞（60.64±9.11）（P＜0.01），CA组CD8+T细胞表达（228.86±33.26）显著高于正常对照组（35.59±6.17）（P＜0.01），CA组CD4+/CD8+的比值（0.81±0.10）显著低于正常对照组（1.73±0.25）（P＜0.01）；经统计学分析CA患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞的变化与皮损局部的CD4+T细胞、CD8+T细胞的变化尚不能认为有相关性（P＞0.05）。
结论 CA患者存在细胞免疫功能降低，CA的发病（包括亚临床感染、潜伏感染）、复发及再感染与机体的细胞免疫功能密切相关，从而为CA的治疗提供理论依据。
［关键词］ 尖锐湿疣；T细胞亚群；流式细胞仪；免疫组织化学
Peripheral T cell subset and local cytoimmune function in condyloma acuminatum
YANG Jing.
The Second Hospital,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China
［Abstract］ Objective To study the changes of T cell subset （CD4+,CD8+） in both peripheral blood and partial lesions in patients with condyloma acuminatum（CA）,and the relationship.
Methods To describe the levels of CD4+T cell,CD8+T cell and CD4+/CD8+ in 42 patients with CA and 30 normal controls by flow cytometry;to count the numbers of T cell subset in partial lesions with CA.
Results The levels of CD4+ T cell，CD4+/CD8+ T cell in peripheral blood of the CA were lower than those of the controls（P＜0.01）.The level of CD8+ T cell was higher than that of the controls（P＜0.01）. And the levels of CD4+ T cell，CD8+ T cell in partial lesions of the CA were higher than those of the controls（P＜0.01）.The level of CD4+/CD8+ T cell in partial lesions of the CA was lower than that of the controls（P＜0.01）. The change of peripheral T cell subset was not related to partial lesions T cell subset in patients with CA.
Conclusion The cell-mediated immunodeficiency exists in patients with CA.The occurrence of CA（including subclinic infection,latent infection）,recrudescence and reinfection were associated with the cell-mediated immunity,which provided the guide for the therapy of CA.
［Key words］ condyloma acuminatum；T cell subset；flow cytometry；immunohistochemistry
尖锐湿疣（condyloma acuminatum，CA）又称尖圭湿疣、生殖器疣（genital warts）或性病疣（venereal warts），是由人类乳头瘤病毒（HPV）引起的多发于肛门生殖器部位的增生性疾病，也是一种常见的病毒性性传播疾病（STD）。常见的HPV有6、11、16、18型等，虽然研究表明引起尖锐湿疣的HPV主要是6型和11型［1］，但郭华阳等检测24例复发性尖锐湿疣皮损HPV发现，HPV 16型检出率较高［2］。HPV 16、18在宫颈上皮内瘤样病变Ⅱ~Ⅲ级和宫颈癌中检出率较高，属于高危型。
在我国尖锐湿疣的发病率在逐年上升，现已位居性传播疾病的第二位［3］。尖锐湿疣患者主要为青壮年，女性发病率高于男性，绝大多数传染与性行为有关。
尖锐湿疣的传染源是本病患者、亚临床感染者和带病毒者，在患者病灶的分泌物、白带和精液中都含有人乳头瘤病毒，人与之接触即可发生感染。
Morison和Larcone［4,5］均认为尖锐湿疣的形成、发展与机体细胞免疫功能的改变有密切关系。在HPV感染的各个阶段，机体免疫功能均受到HPV病毒的抑制。即HPV病毒可通过不同的方式破坏免疫细胞，诱导抑制性细胞，产生抑制因子等以降低机体的免疫应答，使之出现病毒的持续性感染［6］。目前认为，外周血T淋巴细胞及其亚群是反映细胞免疫功能最敏感的指标［7,8］。Cauda等报道［9］，尖锐湿疣患者外周血T淋巴细胞亚群异常，Ts升高，Th/Ts比值降低。而尖锐湿疣皮损局部的细胞免疫的变化情况目前国内外的相关报道不多。
本文采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群，用免疫组化的方法检测尖锐湿疣皮损组织中T淋巴细胞亚群的变化情况，并探讨二者的关系及机体的免疫状况，为尖锐湿疣的临床防治及其预后提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 42例尖锐湿疣患者均来自我院皮肤性病科门诊，所有病例均符合卫生部防疫司1991年制定的CA诊断标准。其中男25例，女17例，年龄18~56岁，平均（32.12±8.09）岁；病程1周~12个月，平均4.3个月，全部病例就诊前均未接受过任何治疗（包括激素及免疫调节剂），不合并其他性传播疾病及严重的内脏疾病。外周血正常对照组30例，取自健康体检者，其中男13例，女17例，年龄12~63岁，平均（35.17±13.28）岁；皮肤对照组30例，取自包皮环切术后，年龄8~45岁，平均（23.63±8.36）岁。
1.2 试验方法
1.2.1 标本采集 肘静脉采血2 ml至抗凝管中；2％利多卡因注射液局麻手术切除0.5 cm大小皮损。
1.2.2 试剂 外周血CD4+T细胞,CD8+T细胞抗体（CD4+FITC/CD8+PE）购自法国IMMUNOTECH公司。
免疫组化CD4+T细胞,CD8+T细胞抗体购自福建迈新生物技术开发公司。
CD4+T细胞抗体为鼠抗人单克隆抗体（编号MAB－0251），工作浓度1∶20，CD8+T细胞抗体为鼠抗人单克隆抗体（编号MAB－0021），为工作即用型。SP试剂盒为福建迈新公司产品。
1.2.3 流式细胞仪分析 采用美国COULTER公司生产的流式细胞仪。
1.2.4 免疫组化 福尔马林浸泡组织，常规石蜡包埋组织，切片厚5 μm。石蜡脱水 3％双氧水室温孵育10 min以消除内源性过氧化物酶的活性。
蒸馏水洗涤5 min。PBS液洗涤3遍。CD4+T细胞用EDTA进行抗原修复，CD8+T细胞用枸橼酸热修复。血清封闭20 min。倾去血清，分别加一抗，4 ℃过夜。室温放置30 min。
PBS冲洗，5 min×3次。滴加二抗，37 ℃孵育30 min。PBS冲洗，5 min×3次。滴加三抗，37 ℃孵育30 min。PBS冲洗，5 min×3次。DAB显色。自来水充分冲洗，复染，封片。
1.2.5 统计学方法 应用SPSS 10.0统计软件进行分析。两样本均数比较采用t检验，两组指标间做相关分析。
1.3 结果判定 流式细胞：计数每1万个细胞中标记细胞的百分比。免疫组化：以细胞膜出现棕黄色染色为阳性细胞。独立观察每张切片5个具有代表性的高表达视野，分别计数每个高倍镜视野下阳性细胞的数量，计算均数和标准差。