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【摘要】 目的 探讨血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）与乳腺癌血管生成及临床病理参数的关系。 方法 采用S-P免疫组化法，检测54例乳腺癌石蜡标本中VEGF蛋白的表达及平均微血管密度（miscrovessel density，MVD）。 结果 癌组织中VEGF表达阳性率为75.93%。VEGF表达及MVD值与组织学分级（P<0.05）和淋巴结转移密切相关（P<0.01），而与组织学分型无关（P>0.05）;VEGF阳性组MVD值明显高于VEGF阴性组（t=2.220，P<0.05）。 结论 VEGF与乳腺癌血管生成密切相关，并能促进其生长、浸润及转移。检测VEGF和MVD可作为反映乳腺癌生物学行为的指标之一。
关键词 乳腺肿瘤 血管内皮细胞生长因子 血管生成 免疫组织化学
肿瘤的生长和转移是一个多步骤的复杂过程，在很大程度上依赖于肿瘤血管生成。目前的研究认为:血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是肿瘤血管生成过程中作用最强、特异性最高的促血管生长因子 ［1］ 。笔者应用免疫组化法检测乳腺癌组织中VEGF和MVD的表达情况，分析VEGF及微血管密度（miscroressel density，MVD）与乳腺癌各临床病理参数的关系，并为临床预后判定和治疗提供进一步的理论根据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 选取我院普外科1996～2003年乳腺癌根治术或改良根治术切除标本54例。病理及临床资料分析结果:浸润性癌40例，其他特殊类型癌14例。组织学分级:Ⅰ级9例，Ⅱ级32例，Ⅲ级13例。有淋巴结转移者30例，无淋巴结转移者24例。患者均为女性，年龄23～68岁（平均52岁），术前均未经任何治疗。
1.2 主要试剂 所用VEGF、CD34单克隆抗体及超敏（鼠）S-P试剂盒，均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.3 S-P免疫组化染色 操作步骤从略。其中鼠抗人VEGF单克隆抗体采用高温高压进行抗原修复。每次试验以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，以已知VEGF阳性的切片作为阳性对照。
1.4 结果判定
1.4.1 VEGF表达 根据阳性细胞数及染色强度进行综合判定，即按5%以上细胞浆或细胞膜呈棕黄色染色者为VEGF蛋白表达阳性。
1.4.2 MVD计数 参照Maeda等报道 ［2］ 的方法，即低倍镜下，全面观察CD34染色阳性的血管，选取肿瘤微血管密度最高区域，然后在高倍镜下（×200）选取5个不重复视野进行计数，求其平均数即作为该病例的MVD值。统计的微血管标准:单个的棕黄色内皮细胞或内皮细胞团均计数为一个血管;肌层较厚及管腔红细胞数>8个的血管不被计数。
1.5 统计学方法 采用χ 2 检验、t检验、F检验及q检验。
2 结果
2.1 VEGF蛋白表达 VEGF蛋白定位于肿瘤细胞胞浆及胞膜，阳性表达为胞浆或胞膜染为棕黄色，呈弥漫或散在的颗粒状。在54例乳腺癌组织中，VEGF表达阳性41例（75.93%），癌间质内皮细胞不表达或呈弱阳性表达，癌旁组织几乎不表达。
2.2 MVD检测 CD34定位于血管内皮细胞胞浆，呈棕黄色。所有的病例的血管内皮细胞均为CD34染色阳性。癌组织MVD值11～106个不等，平均为（49.5±25.4）个。
2.3 VEGF蛋白表达及MVD与临床病理参数间的关系
2.3.1 组织学分级 VEGF表达阳性率及MVD值随组织学分级增高而逐渐增加。VEGF表达在Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅲ级间，差异具有显著性（P均<0.05）。单因素方差分析显示，三组间MVD值比较差异具有非常显著性（P<0.01）。两组间比较:Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅲ级间差异有显著性（P<0.05和P<0.01）。而Ⅱ级与Ⅲ级间VEGF表达阳性率及MVD值差异均无显著性（P>0.05）。
2.3.2 淋巴结转移 VEGF表达阳性率在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P<0.01）。MVD值在两组间差异也具有非常显著性（P<0.01）。
2.3.3 组织学类型 VEGF表达阳性率和MVD值在两个不同组织学类型间差异无显著性（P>0.05）。
2.4 VEGF表达与MVD值的关系 VEGF表达阳性组的MVD值明显高于VEGF表达阴性组（P<0.05）。
3 讨论
VEGF是目前研究较为深入的促血管生成因子，对肿瘤基质血管形成及肿瘤生物学行为均有重要影响。VEGF也称血管渗透因子（VPF），是特异性的血管内皮细胞刺激因子，它与血管内皮细胞的相应受体结合，刺激血管内皮细胞的增殖，同时还可促进血管内物质的泄露，导致血管形成和新的基质形成，为肿瘤的浸润和转移提供了合适的基础。大量的实验研究证实 ［3～5］ ，几乎所有的恶性肿瘤都表达较高水平的VEGF，而在周围正常组织中无或仅有极低水平的表达 ［6］ ，因此可以说VEGF对肿瘤组织具有良好的特异性。本试验结果显示，在54例乳腺癌中，VEGF表达阳性率占75.93%，而癌旁组织阴性，提示肿瘤细胞可分泌VEGF，通过VEGF刺激微血管形成，肿瘤增殖速度加快，反映了恶性肿瘤的特征。Toi等的研究也证实了VEGF表达与血管生成过程及乳腺癌预后不良有关。另外，我们发现血管内皮细胞不表达或个别呈弱阳性表达，与文献一些报道相似，进一步证实了VEGF主要以旁分泌途径作用于血管内皮细胞的推测。
肿瘤细胞的微血管数量是患者预后的危险因素。Wei-dner等的研究发现:乳腺浸润性癌间质中，具有突出的血管成分者更具有侵袭性。本研究显示VEGF表达和MVD值均随组织学分级的增高和淋巴结的转移而明显增加，与多数文献报道结果一致，反映了VEGF、MVD与肿瘤侵袭和转移的关系极为密切，提示血管形成是乳腺癌发生转移的重要条件。已有研究表明VEGF与MVD值呈正相关。本研究中46例乳腺癌组织VEGF阳性表达组MVD值明显高于阴性表达组，显示了肿瘤组织中VEGF状态与MVD值的密切关系，说明VEGF可以通过促进乳腺癌血管形成，从而在肿瘤发生、发展和转移过程中发挥重要作用，这不仅为我们进一步认识肿瘤生长、浸润提供了理论依据，对进一步探讨肿瘤的预后及治疗也具有重要的意义。
综上所述，VEGF可促进乳腺癌血管形成，进而促进乳腺癌的生长、浸润和转移。VEGF、MVD可作为反映乳腺癌生物学行为的指标之一。联合检测VEGF和MVD可以更好地为临床判断预后及治疗提供参考依据。
参考文献
1 Deroanne CF，Hajiton A，Calberg CM，et al.Angiogenesis by fibroblast growth facter4is mediated through an autocrin up-regulation of vascu-lar endothelial growth factor expression.Cancer Res，1997，57（24）:5590-5597.
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4 Suzuki K，Hagashy N，Miyamoto Y，et al.Expression of vascular perme-ability factor vascular endothelial growth factor in human hepatocellular carcinoma.Cancer Res，1996，56（13）:3004-3009.
5 Da Silva ID，De Lime GR，Gerbrim LH，et al.Invasive ductal carcinoma fibroadenoma and adjacent breast stroma-angiogenesis:an immunohis-tochemical and morphometricoal study.Bull Assoc Anat（Nancy），1996，80:17-19.
6 郭仁德.血管内皮生长因子与肿瘤的研究进展.医学综述，2002，8（2）:68-70.
（编辑田 雨）
作者单位:150010黑龙江省哈尔滨市第一医院病理科