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Department of Pathology，Shengli Petroleum Administration Central Hospital，Dongying257034，China
【Abstract】 Objective To study the relationship between microvessel density（MVD）and apoptosis in gastric carci-noma.Methods TUNEL method was used to detect apoptotic cells，immunohistochemical staining was used to detect the expression of FactorⅧ-related antigen in81cases of gastric carcinoma.Results MVD was the lowest in well and moderately differentiated adenocarcinoma，butMVD was the highest in poorly differentiated adenocarcinoma.It was inverse correlation between MVD and apoptosis in gastric carcimona.Conclusion The incidence of apoptosis in tu-mors was significantelly affected by the extent of tumor angiogenesis.Angiogenesis can depress the incidence of apopto-sis.
【Key words】 gastric carcinoma;microvessel density;apoptosis
近年来，大量研究表明，肿瘤是一种血管依赖性病变，肿瘤的生长和转移不仅依赖于细胞的增殖，而且与肿瘤内新生血管的形成有关。目前已知，在乳腺癌 ［1］ 、卵巢癌 ［2］ 、肺癌 ［3］ 等恶性肿瘤中，肿瘤内微血管密度（MVD）与肿瘤的侵袭、转移及预后有密切关系。但MVD与胃癌的生物学特性及细胞凋亡的关系研究较少，本文应用TUNEL方法结合免疫组织化学方法对81例胃癌进行了细胞凋亡与MVD检测，旨在探讨胃癌组织中MVD与细胞凋亡的关系。
1 资料和方法
1.1 资料 收集胜利石油管理局中心医院自1993年1月～1994年11月间，临床及病理资料较完整的81例胃癌手术切除标本作为研究对象。其中男69例，女12例;年龄29～83岁，平均57.1岁。所有病例手术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗。
1.2 方法 标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成4μm厚连续切片。分别做HE染色TUNEL原位细胞凋亡检测和免疫组织化学S-P法染色。所用第一抗体F-Ⅷ为美国Maxim公司生产的多克隆抗体。用不加一抗的切片作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照，用DAB显色，苏木素复染。
1.3 结果判断
1.3.1 凋亡指数（apoptosis index，AI） 光镜下选凋亡细胞最多的5个高倍视野，每个视野计数100个细胞中凋亡细胞数，取其平均值为凋亡指数AI。用半定量表示:（-）AI<5%;（+）AI5%～10%;（++）AI11%～15%;（+++）AI>15%。凋亡细胞核固缩呈圆形或椭圆形，深紫蓝色，染色体沿核膜形成半月状或新月状。
1.3.2 微血管密度（MVD） 光镜下，在20×10倍视野下选3个被F-Ⅷ相关抗原染成棕黄色的微血管最密集视野，计数微血管数，然后求其平均值为MVD。凡管腔大于8个红细胞大小，带有肌层的血管不予计算。
1.4 统计学分析 计数资料采用χ 2 检验，计量资料用ˉx±s表示，组间比较用t检验。
2 结果
2.1 MVD与胃癌临床病理特征的关系 本组81例胃癌患者中，MVD在患者的性别、肿瘤的体积、发生部位、浸润深度、有无淋巴结转移及临床分期诸方面差异均无显著性（P>0.05）。≤59岁年龄组MVD为（39.22±3.88），≥60岁年龄组MVD为（28.18±2.18），两组之间差异有显著性（P<0.05）。高中分化腺癌的MVD最低，为20.32±2.36;而低分化腺癌的MVD最高，为50.33±4.54。高中分化腺癌与低分化腺癌及印戒细胞癌之间，差异有高度显著性（P<0.01）。低分化腺癌与印戒细胞癌及鳞癌之间MVD差异也有显著性（P<0.05），低分化腺癌与黏液腺癌之间，差异有高度显著性（P<0.01）。黏液腺癌与鳞癌之间MVD差异无显著性（P>0.05），黏液腺癌与印戒细胞癌之间差异有显著性（P<0.05）。高中分化腺癌与黏液腺癌及鳞状细胞癌之间MVD差异无显著性（P>0.05）。见表1。
2.2 胃癌细胞凋亡指数与MVD的关系 胃癌细胞凋亡指数与MVD的关系见表2。由表中可知，随着AI的增高，MVD逐渐减低，AI（-）与AI（+）及AI（++）MVD之比，差异有显著性（P<0.05）;AI（-）与AI（+++）MVD之比，差异有高度显著性（P<0.01）。
表1 MVD与胃癌临床病理特征的关系（略）
表2 胃癌细胞凋亡指数与微血管密度的关系（略）
注:a∶b t=2.14P<0.05;a∶c t=2.15P<0.05;a∶d t=3.49P<0.01
3 讨论
目前，大量研究证实，肿瘤内微血管密度是影响肿瘤生物学特性的重要因素，肿瘤内血管形成的程度与肿瘤的临床病理特征和预后有密切的关系 ［4，5］ 。本组胃癌的研究结果发现，肿瘤内微血管密度与患者的年龄及肿瘤的组织学类型和分化程度密切相关，高中分化腺癌的MVD最低，而低分化腺癌的MVD值最高。Tenderenda等 ［6］ 的研究也发现，高分化及中分化胃癌的MVD低于低分化胃癌，提示在胃癌中，MVD可作为判断肿瘤恶性程度的重要参数。
肿瘤中MVD的增高，增加了肿瘤的血液供应，有利于 肿瘤的生长。同时肿瘤中微血管生成增多，又增加了肿瘤细胞进入微循环，产生血道转移的机会 ［7］ 。肿瘤中新生的微血管在结构上有明显的缺陷，其基底膜较薄弱且有较大的裂隙，肿瘤细胞容易侵入这种有缺陷的微血管而产生转移。此外，肿瘤细胞还可通过淋巴静脉的连接而侵入淋巴系统，导致淋巴结转移。近年研究表明，血管内皮细胞能释放碱性纤维细胞生长因子，胰岛素生长因子-2和血小板衍生生长因子等重要的旁分泌生长因子，可直接促使肿瘤生长 ［8］ 。此外，血管内皮细胞还能分泌尿激酶、胶原降解酶和纤溶酶原激活剂等，使肿瘤细胞能进入并穿透临近的纤维间质，为其浸润和转移创造了条件。通过光镜观察，我们发现，胃癌组织内的MVD较周围正常组织高，肿瘤边缘区域的MVD大于肿瘤中心区域的MVD，这表明肿瘤细胞在向外浸润性生长的过程中，新生血管是与其同步进行的。有人研究表明，进入血管的癌细胞数与血管的密度呈正比。
肿瘤的生长状况与血管形成的数量密切相关，而血管形成的多少又与肿瘤细胞凋亡的数量相关。本研究结果表明，随着AI的增高，MVD逐渐减低，AI（-）与AI（+）及AI（++）MVD之比，差异有显著性（P<0.05）;AI（-）与AI（+++）MVD之比，差异有高度显著性（P<0.01）。这表明，胃癌组织中的MVD与胃癌细胞的凋亡呈负相关。Lu等 ［9］ 曾对101例胃癌标本进行AI和MVD测定，也发现AI与肿瘤内MVD呈负相关。由此可知，肿瘤组织中凋亡细胞的发生率明显受瘤组织内新生血管程度的影响，新血管的形成可以降低凋亡细胞的发生。
【参考文献】
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作者单位:257034山东东营，胜利石油管理局中心医院病理科