点击显示 收起
关键词 食管肿瘤 放射治疗 食管癌转移抑制因子nm23 微血管密度 相互影响分析
Clinical value of expression of suppressor gene of tumor metastasis nm23
and microvessel density in the radiotherapy for esophageal carcinoma
Wang Yang，He Shaoqin，Shi Xuehui，et al.
Department of Radiation Oncology，Cancer Hospital，Fudan University，Shanghai200032.
【Abstract】 Objective To determine the clinical value of the expression of suppressor gene of tumor metastaˉsis nm23and microvessel density（MVD）and the outcome of radiotherapy of esophageal carcinoma.Methods In59cases of esophageal cancer，expression of nm23gene and MVD of the biopsies from endoscopic examination were perˉformed by immunohistological stain.Correlation between expressionof nm23and MVD and clinically pathological endˉpoints and prognosis were analyzed.Results Primary study demonstrated that the expression of nm23and MVD had nosignificant correlation with clinical endpoints such as gender，classification and histological grade.Neither correlaˉtion between nm23and local control or overall survival rate nor that between MVD and local control or overall survival rate was found significanth.Although there is a trend that decreasing incidence ofdistant and local lymph node metasˉtasis is accompanied by elevated nm23expression and low MVD，the correlation is not significant.Conclusion Alˉthough our study did not show any correlation between nm23and MVD and metastasis and prognosis in the radiotheraˉpy for esophageal carcinoma，further study by uniform analysis method is needed for the limited cases.
Key words esophageal neoplasms/radiotherapy suppressor gene of tumor metastasis nm23 microvessel denˉsity transactional analysis
影响食管癌放射疗效的因素很多，传统的预后参数诸如肿瘤长度、组织学分类、临床分期等为临床提供了不少帮助。随着放射治疗技术的完善，食管癌局部控制率有所提高，临床所见远处转移病例愈来愈多。近年来研究发现肿瘤转移可受转移抑制基因和肿瘤微环境的调控。目前转移抑制基因nm23和微血管密度（MVD）在肿瘤转移过程中的作用日益受到重视 ［1，2］ 。而有关nm23表达和MVD在食管癌放射治疗中的临床研究较少，为此，笔者通过检测放射治疗前食管镜活检组织nm23表达和MVD，分析nm23表达和MVD与食管癌转移的相关关系及其在放射治疗中的临床应用价值。
1 资料与方法
1.1 研究对象 1994年11月～1998年7月收治的59例无基金项目:卫生部直属医疗单位临床学科重点项目（97030222） 远处转移的食管鳞癌，疗前均行食管镜检查并取活检。其中男42例，女17例;年龄42～80岁，中位年龄65岁。参照1976年全国食管癌工作会议制订的食管癌临床病理分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期14例，Ⅲ+Ⅳ期40例。
1.2 放射治疗方法 选用Co 60 γ射线或6MV X线或18MV X射线。50例患者接受常规分割放射治疗，55.0～71.9Gy，29～39分次，42～62d完成;9例后程加速超分割放疗，68～71.6Gy，40～41分次，44～47d完成。所有患者放疗前及放疗中未予化疗。
1.3 免疫组织化学染色（EnVision二步法） （1）石蜡切片5μm，烤片50～60℃4h，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化。（2）置枸橼酸钠缓冲液（pH6.0），经微波抗原修复（95℃，5min，2次），室温下自然冷却。（3）TBS缓冲液（pH6.0，0.05ml）洗涤3次，3min/次。（4）第1抗体（鼠抗人）［nm231:500（丹麦Dako公司），CD341:50（丹麦DAKO公司）］室温孵育60min后4℃冰箱过夜。（5）TBS缓冲液洗涤3次，3min/次。（6）第2抗体（EnVision）室温下作用30min。（7）TBS缓冲液洗涤3次。（8）0.4%DBA-H 2 O 2 显色。（9）流水洗涤，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。此外，以TBS缓冲液代替1抗作为阴性对照。
1.4 结果评定 nm23检测标准 ［3］ 按细胞染色程度计分。0分:无染色;1分:浅黄色;2分:棕黄色;3分:棕褐色。按染色瘤细胞占瘤细胞总数的比例计分。1分:<1/3;2分:1/3～2/3;3分:>2/3。每例肿瘤积分=染色程度得分×瘤细胞所占比例得分，按积分高低分3等:阴性:0分;弱阳性:1～4分;强阳性:>4分。MVD检测 ［4］ :染成棕色的单个血管内皮细胞或血管内皮细胞簇，视为一个微血管。先用40倍光镜扫视整个切片，寻找高血管密度区，即“热点”，然后在200倍视野下计数血管数目，记录3个视野内的微血管数，取其平均数作为该病例的MVD。按中位值分低密度组和高密度组。
1.5 统计学方法 采用SPSS8.0统计软件包，运用X 2 检验分析nm23表达和MVD与临床病理指标的相关性。应用Kaplan-Meier法和Log rank法进行局部控制率和总体生存率单因素分析，应用Cox比例风险模型进行局部控制率和总体生存率的多因素分析。
2 结果
2.1 本组nm23和MVD表达 nm23蛋白阳性染色为浅黄、棕黄或棕褐色颗粒，定位于肿瘤细胞浆内。nm23阳性表达40例（67.8%），其中弱阳性16例（27.1%），强阳性24例（40.7%）;MVD表达:食管癌组织中的毛细血管、小静脉和小动脉内皮细胞均显示CD34抗体染色阳性。
2.2 临床因素与nm23表达与MVD的关系 nm23阳性表达与MVD和性别、年龄、分期、累及全周情况及癌组织分化程度无显著相关关系（见表1、表2）。
表1 本组病例临床因素与nm23蛋白表达的关系 （例）
注:因个别项目例数太少，在统计分析时作部分合并
2.3 nm23表达与MVD的关系 本研究未发现nm23表达与MVD水平之间存在显著相关关系，详见表3。
表3 本组病例nm23表达与MVD的关系 （例）
2.4 局部控制率和总体生存率分析 本组病例1、2、3、4和5年局部控制率分别为57.7%、45.9%、42.6%、42.6%和32%;1、2、3、4和5年生存率分别为58.2%、34.4%、27.8%、25.2%和25.2%。局部控制率多因素分析未能提出影响食管癌放射治疗局部控制率的独立预后因子，详见表4。
表4 本组病例局部控制率因素分析因素
总体生存率单因素分析显示病灶累及全周是影响总体生存率的预后因子，即放射治疗前肿瘤累及食管壁全周的患者预后较差。而Cox模型多因素分析未能发现影响总体生存率的独立预后因子，详见表5。
2.5 nm23表达与MVD与远处转移和区域淋巴结转移的相 关关系 详见表6。进一步分析nm23表达与MVD与本组病例远处转移和区域淋巴结转移的相关关系，结果显示随着nm23阳性表达的增强，远处转移和区域淋巴结转移有减少的趋势，但差异未达到显著性水平。而随MVD的增加远处转移和区域淋巴结转移有增加的趋势，但差异亦未达到显著性水平。
表5 本组病例总体生存率因素分析因素
表6nm23表达与MVD和远处转移与区域淋巴结转移相关关系 （例）
3 讨论
转移抑制基因nm23的发现是近年来有关肿瘤转移研究的重要贡献。1988年Steel等 ［5］ 首先分离鉴定了nm23基因，它定位于人体17号染色体长臂17q22上，编码的蛋白与人红细胞二磷酸核苷酸激酶（NDPK）有高度同源性。nm23基因抑制肿瘤转移的机制尚不完全清楚。目前认为nm23基因编码NDPK，NDPK能使5’NTP的λ-磷酸基因转移到5’NDP，使GDP还原为GTP，而GTP有调节细胞膜G蛋白的功能以参与跨膜信息传递和影响微管、微丝等细胞骨架蛋白的生物活性，从而阻断