注射用雷贝拉唑钠的质量研究

【摘要】  目的 通过对注射用雷贝拉唑钠质量方法的研究，制定出符合注射用雷贝拉唑钠的质量标准。方法 参考《中国药典》2005年版二部附录规定的检测方法，制定合适的注射用雷贝拉唑钠的鉴别、检查方法，采用高效液相法测定有关物质及含量，色谱柱：C18柱（5μm,150mm×4.6mm）；流动相：乙腈-水-三乙胺（30:70:0.5）（pH=7.0）；检测波长为292nm。结果 注射用雷贝拉唑钠在60.05～140.11μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系（r2=0.9994）,RSD=0.442%。结论 制定的方法专属性强，重复性好，可以作为检查注射用雷贝拉唑钠质量的检测依据。

【关键词】  注射用雷贝拉唑钠；有关物质；含量测定；高效液相色谱法

    消化系统病症是常见的多发病之一，其中溃疡病为最常见。据IMS HEALTH的MIDS系统统计，治疗溃疡病药物一直稳居全球销售额首位。

    近十几年抗溃疡药物研究已趋向于能选择性抑制胃酸分泌的药物，这些药物大致分为以下四类：（1）胆碱能M-受体拮抗剂，如哌仑西平；（2）组胺H2-受体拮抗剂，如西咪替丁和雷尼替丁；（3）黏膜保护促进剂，如前列腺素类似物PGE2等；（4）质子泵抑制剂（PPI）－H+/K+ -APT酶抑制剂，如奥美拉唑和雷贝拉唑钠。M-受体拮抗剂因副作用大，而抗溃疡作用较弱，逐渐被H2-受体拮抗剂所取代；后者目前虽然方兴未艾，且几经改进，但有不适应证和副作用等缺陷［1，2］。作为细胞保护剂前列腺素类似物因其来源和合成困难，且作用强度不大，前景不太理想。20世纪80年代开发上市的PPI，因其作用机制独特，作用特异性高，作用强度大且时间长，广泛用于与酸有关的各种紊乱性疾病而日益受到青睐。

    雷贝拉唑钠是一种苯并咪唑取代物，通过与胃腔内壁细胞质子泵的键合，抑制胃酸分泌［3］。本品特异性抑制三磷酸腺苷酶的作用，该酶是胃酸生成的关键酶。雷贝拉唑钠（Rabeprazole sodium）是由日本卫材公司开发的质子泵抑制剂，国内外已经上市的剂型有肠溶片和肠溶胶囊，我公司已经成功开发出雷贝拉唑钠肠溶胶囊，规格为10mg/粒。注射用雷贝拉唑钠于2004年7月在印度上市，剂量为20mg，生产公司为印度Cadila制药有限公司，商品名：Rabeloc IV。为方便临床选择用药，我们研制了注射用雷贝拉唑钠，规格为20mg/瓶。

    综上所述，为控制产品的质量，本文设计了注射用雷贝拉唑钠的质量研究。

    1  药品、材料和仪器

    1.1  药品  （1）样品：样品批号及规格：050304、050306、050308（20mg/瓶）；样品处方：雷贝拉唑钠：甘露醇（20mg:40mg）；样品来源：扬子江药业集团有限公司药物研究所自制。（2）对照品：本品对照品来源：以公司申报原料精制方法纯化所得精制品（批号：041225），其有关物质为0.15%，含量为99.82%，可作为分析用对照品。

    1.2  材料  甘露醇：注射级，青岛明月海藻集团有限公司提供；甲醇：色谱级，国药集团化学试剂有限公司提供；乙腈：色谱级，国药集团化学试剂有限公司提供；三乙胺：分析纯，天津市博迪化工有限公司提供。

    1.3  仪器  紫外分光光度计：UV2401PC（日本岛津）；高效液相色谱仪：LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器（日本岛津）；分析天平：100AS（德国赛多利斯）；酸度计：PHS-25C（上海鹏顺科学仪器有限公司）；微粒分析仪：GWF-5J（天河医疗仪器有限公司）。2  注射用雷贝拉唑钠的质量研究

    2.1  性状  取本品三批样品（批号：050304、050306、050308），目测检查；结果：三批样品均为白色疏松块状物及粉末；本品所用的原料（雷贝拉唑钠）及辅料（甘露醇）均为类白色或白色，且为冷冻干燥制品。样品性状由原辅料性状决定，根据以上结果确定本品性状为：本品为白色或类白色疏松块状物及粉末。

    2.2  鉴别

    2.2.1  雷贝拉唑钠特征反应  根据原料的鉴别方法确定本品的化学鉴别方法为：取本品适量（约相当于雷贝拉唑钠10mg），加水20ml使溶解，取2ml，加稀盐酸5滴，再加硅钨酸试液1ml，摇匀，即产生白色絮状沉淀。取注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：050304、050306、050308），依上法测定，均产生白色絮状沉淀。用处方量辅料，参照上述方法进行试验，结果无白色絮状沉淀。结果显示：本品所用辅料对上述鉴别无影响。上述鉴别方法专属性强，列入标准。

    2.2.2  高效液相色谱法［4］  在含量测定项下记录的高效液相色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰保留时间一致。取本品三批样品（批号：050304、050306、050308）及雷贝拉唑钠对照品，依上法测定，结果见图1～4。

    按处方量比例配制辅料空白液，照含量检测法色谱条件进样，在对照品主峰保留时间位置，空白液无峰，结果见图5。综合以上结果，高效液相鉴别方法专属性强，列入标准。

     2.2.3  钠盐鉴别反应  本品为苯并咪唑的钠盐，因此应符合钠盐的鉴别反应，方法如下：取铂丝，用盐酸润湿后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。对注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：050304、050306、050308），依上法测定，均有鲜黄色火焰。取处方量辅料，参照上述方法进行试验，结果火焰无色。结果显示：本品所用辅料对上述鉴别无影响。上述鉴别方法专属性强，列入标准。

    3  检查

    3.1  碱度  仪器：PHS-25C型酸度计；试剂：仪器校正用标准缓冲溶液；试验方法：取混合磷酸盐标准缓冲液（pH 6.86）校正pH计（雷磁PHS-25C），使仪器示值为pH 6.86，定位后，用pH 9.28的四硼酸钠缓冲液核对仪器示值，调斜率使示值为pH 9.28。取注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：050304、050306、050308）各1瓶，加水20ml使溶解，照pH值测定法，依法测定（中国药典2005年版二部附录Ⅵ H）［5］，测得结果见表1。表1  注射用雷贝拉唑钠碱度测定结果根据样品的pH值测定结果及处方工艺筛选结果确定本品的碱度范围为：9.5～11.5。

    3.2  溶液的澄清度与颜色  试剂：浊度标准液；澄清度试验方法：取三批样品各5瓶，分别加注射用水5ml使溶解，与5ml浊度标准液在暗室内垂直同置于伞棚灯下，照度为1000lx,从水平方向观察、比较；检查溶液的澄清度及其浑浊程度，结果见表2；试剂：黄色标准比色液；颜色试验方法：取三批样品各5瓶，分别加注射用水5ml使溶解，与5ml黄色1号标准液同置白色背景下，平行观察，检查溶液颜色，结果见表2。本品稳定性考察结果表明：本品在考察过程中溶液的颜色略有加深，其他指标均无明显变化，故参照稳定性考察结果，将本品临床试验用质量标准中溶液的颜色限定为“不超过黄色标准2号色”；由以上结果确定：本品溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2005年版二部附录Ⅸ B）比较，不得更浓；如显色，与黄色2号标准液（中国药典2005年版二部附录Ⅸ A）比较，不得更深。表2  注射用雷贝拉唑钠澄清度与颜色测定结果

    3.3  水分  本试验分别采用干燥失重和费休氏法测定本品的水分，比较结果，选择并最终确定注射用雷贝拉唑钠的水分测定方法。

    3.3.1  干燥失重测定水分  取三批样品各约1.0g，平行取3份，置于洁净、干燥并精密称定的扁形容量瓶中，精密称定，于五氧化二磷减压干燥至恒重后，置干燥器中放冷至室温，称重，根据减失重量计算本品的干燥失重（中国药典2005年版二部附录Ⅷ L）［5］。干燥失重结果见表3。干燥失重=（未干燥前重量-干燥后重量）/未干燥前重量×100%。

    3.3.2  水分测定  取三批样品各100mg，照水分测定法（中国药典2005年版二部附录Ⅷ M第一法 卡尔·费休法）测定［5］，结果见表4。结果：分别采用干燥失重及水分测定本品三批样品的含水量，结果表明两法测定的结果无明显差异，均不超过5.0%。考虑到操作方便和结果的精密度，本品采用费休氏法进行测定水分，限度为不超过5.0%。表3  注射用雷贝拉唑钠干燥失重结果表4  注射用雷贝拉唑钠水分测定结果

    3.4  装量差异检查  照（中国药典2005年版二部附录ⅠB）注射剂项下的注射用无菌粉末的装量差异检查法检查［5］。取三批样品各5瓶，除去标签、铝盖，瓶外壁用乙醇洗净，热风干燥，开启瓶盖，分别迅速精密称定，倾出内容物，瓶内壁用水、无水乙醇洗净，在热风下干燥，再分别称定每瓶的重量求出每一瓶的装量与平均装量，计算装量差异。检查结果见表5。

    3.5  不溶性微粒  仪器：GWF-5J微粒分析仪；试验方法：取样品2瓶，加入5ml注射用水使溶解，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，先倒出部分供试品溶液冲洗开启口及取样杯，再将供试品溶液倒入取样杯中，静置脱气后，置于取样器上，开启搅拌，使溶液混合均匀（避免气泡产生），依法测定3次，每次取样5ml，记录数据，每个样品的第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，另取本品4瓶，同法测定，取3次结果的平均值。结果三批样品的不溶性微粒均符合规定，检查结果见表6。

    3.6  可见异物  试验方法：取三批样品各20瓶，除去溶液标签，擦净容器外壁，分别加入5ml无菌注射用水使溶解，轻轻旋转和翻转容器使药液中存在的可见异物悬浮，置供试品于遮光板边缘处，光照度为2000lx,在明视距离（供试品至人眼的距离为25cm），分别在黑色和白色背景下，手持供试品颈部使药液轻轻翻转，用目检视（中国药典2005年版二部附录XI H）［5］，结果均符合要求，见表7。表5  装量差异检查结果 表6  注射用雷贝拉唑钠不溶性微粒检查结果 表7  注射用雷贝拉唑钠可见异物检查结果

    4  含量测定

    采用高效液相色谱法（HPLC法）。

    4.1  仪器与试药  仪器：高效液相色谱仪，LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器（日本岛津）；试剂：乙腈（色谱级）、三乙胺（分析级）；流动相：乙腈-水-三乙胺（30:70:0.5）（用磷酸调pH值至7.0）；混合溶剂：乙腈-水-三乙胺（30:70:0.5）（用磷酸调pH值至10.0）。

    4.2  检测波长的选择  精密称取雷贝拉唑钠对照品20mg，加“4.1项下”混合溶剂溶解并稀释,制成每1ml中含雷贝拉唑钠100μg的溶液，照分光光度法（中国药典2005年版二部附录IV A）测定，在200～400nm波长范围内进行紫外扫描，结果见图6。

    图6  含量测定HPLC法紫外扫描图

    由图6可见本品在215nm、292nm波长处有最大吸收，215nm属于边缘吸收波长，会对测定结果产生影响，故我们选择292nm作为含量测定的波长。

    4.3  色谱条件与系统适用性  色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒度5μm，规格:150mm×4.6mm；流动相：乙腈-水-三乙胺（30:70:0.5）（用磷酸调pH值至7.0）；混合溶剂：乙腈-水-三乙胺（30:70:0.5）（用磷酸调pH值至10.0）；流速：1.0ml/min；检测波长：292nm；进样量：10μl。

    4.4  专属性试验  按处方比例称取辅料甘露醇20mg，置100ml量瓶中，加“4.1项下”混合溶剂溶解并稀释至刻度，制成不含主药的辅料空白溶液；另取雷贝拉唑钠对照品10mg，同法制成对照品溶液。分别取对照品溶液、辅料空白液及溶剂，照“4.3项下”的色谱条件进样10μl，记录色谱图，结果见图7～9。结果表明：在雷贝拉唑钠主峰位置，溶剂和辅料不出峰，溶剂和辅料对雷贝拉唑钠的含量测定无影响。

    4.5  标准曲线的制备  精密称取雷贝拉唑钠对照品100.08mg，置100ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液；分别精密量取储备溶液3、4、5、6ml和7ml，置50ml量瓶中，再加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，分别量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度（C）为横坐标，雷贝拉唑峰峰面积（A）为纵坐标，计算回归方程，并绘制标准曲线，结果见表8。结果表明：本品供试溶液在60.05～140.11μg/ml浓度范围内，线性良好。并确定含量检测浓度为：100μg/ml。

    4.6  溶液稳定性  取注射用雷贝拉唑钠（050304批）粉末30mg，置100ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，配制成每1ml含雷贝拉唑钠100μg的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12h进行测定，记录峰面积。见表9。结果表明：本品供试溶液常温放置12h稳定。表9  雷贝拉唑钠溶液稳定性

    4.7  回收率试验  取雷贝拉唑钠对照品及处方量辅料，雷贝拉唑钠对照品按本品处方量的80%、100%、120%分别投料，按处方工艺制成注射液50ml。分别精密量取溶液1ml，置100ml量瓶中，加混合溶剂稀释定溶至刻度，作为供试品溶液。照含量测定项下的方法，分别测定三批样品的含量，计算回收率。测定结果见表10。

    4.8  重复性试验  取注射用雷贝拉唑钠（批号：050304），照“4.6溶液稳定性”的方法配制样品。同一人、同一天内、同一台检测仪器上，重复测定样品含量，共测定6次，计算含量及RSD，测定结果见表11。

    结果表明：此种方法的含量测定重复性好。

    4.9  中间精密度试验  取注射用雷贝拉唑钠（批号：050304），照“4.6溶液稳定性”的方法配制样品。分别由3人于3台不同的高效液相色谱仪上3天测定本品的含量，结果见表12。表10  回收率试验结果表11  注射用雷贝拉唑钠重复性测定结果（HPLC）  表12  中间精密度试验（批号：050304）结果表明：本方法测定注射用雷贝拉唑钠中间精密的较好。

    4.10  三批样品的含量测定  精密称取装量差异下三批样品的细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠50mg），置100ml量瓶中，加［乙腈：水：三乙胺（30：70：0.5）（用磷酸调pH值至10.0）］溶液稀释至刻度,摇匀， 再精密移取5ml至25ml量瓶中，用上述混合溶剂定容，摇匀，作为供试品溶液。精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取雷贝拉唑钠对照品适量，制成100μg/ml的对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中雷贝拉唑钠的含量。结果见表13。表13  注射用雷贝拉唑钠三批样品含量测定结果含量计算公式  含量（%）=A样   f平均×（W样 / W平）×20×100%

    根据上述试验结果确定注射用雷贝拉唑钠的含量测定方法同上。5  有关物质

    参考含量测定的方法，确定本品有关物质检测的条件。

    5.1  仪器及试剂  同含量测定项下。

    5.2  色谱条件与系统适用性  同含量测定项下。

    5.3  检测方法  取本品细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），精密称定，置50ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1.5ml，置100ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；照高效液相色谱法进行试验，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高约为记录仪满量程的20%～25%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。

    5.4  专属性试验  方法及结果见含量测定项下； 结果显示：溶剂及选用辅料对有关物质检查无干扰。

    5.5  检测限、定量限  精密称取雷贝拉唑钠对照品67.0mg，加混合溶剂100ml使溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，并按1:100的比例逐级稀释，取每次稀释液10μl进样，记录色谱图，按10倍信噪比计算本品的定量限，约为0.67ng；按3倍信噪比计算本品的检测限，约为0.2ng。结果见图10、11。

    图10  雷贝拉唑钠定量限

    图11  雷贝拉唑钠检测限

    5.6  破坏性试验

    5.6.1  酸破坏  取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，于水浴加热4h后，冷却，加混合溶剂至刻度，摇匀，制成每1ml中含雷贝拉唑钠0.5mg的供试液；取处方量辅料，混匀后，称取适量，同法酸破坏后，制成不含主药的模拟处方溶液。取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图12、13。

    图12  酸破坏样品HPLC图

    图13  酸破坏辅料HPLC图

    5.6.2  碱破坏  取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置50ml容量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，水浴加热4h后，冷却，加混合溶剂至刻度，摇匀，制成每1ml中含雷贝拉唑钠0.5mg的供试液；取处方量辅料，混匀后，称取适量，同法碱破坏后，制成不含主药的模拟处方溶液，取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图14、15。

    图14  碱破坏样品HPLC图

    图15  碱破坏辅料HPLC图

    5.6.3  氧化破坏  取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置50ml容量瓶中，加30%的过氧化氢溶液5ml，水浴加热4h后，冷却，加混合溶剂至刻度，摇匀，制成每1ml中含雷贝拉唑钠0.5mg的供试液；取处方量辅料，混匀后，称适量，同法氧化破坏后，制成不含主药的模拟处方溶液。取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图16、17。

    5.6.4  热破坏  取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置于小烧杯中，电炉直接加热至浅棕色，用混合溶剂溶解制成每1ml含雷贝拉唑钠0.5mg的溶液；取处方量辅料，混匀后，按上法热处理，称取适量，制成不含主药的模拟处方溶液。取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图18、19。

    图16  氧化破坏样品HPLC图

    图17  氧化破坏辅料HPLC图

    图18  热破坏样品HPLC图图19  热破坏辅料HPLC图

    5.6.5  光破坏  取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置于紫外光下直接照射48h，用混合溶剂溶解制成每1ml含雷贝拉唑钠0.5mg的溶液；取处方量辅料，混匀后，按上法光照处理，称取适量，制成不含主药的模拟处方溶液。取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图20、21。

    图20  光破坏样品HPLC图

    图21  光破坏辅料HPLC图    结果显示：本品溶液在强碱性、光照、酸性、高温及氧化条件下产生破坏，在所选的色谱条件下，主峰与降解产物分离完全。

    5.7  三批样品的有关物质检验  取注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：050304、050306、050308），参照“5.3项下”方法检验本品的有关物质，结果见表14。 表14  三批样品有关物质检查结果计算公式：有关物质=（总杂质峰面积 / 1.5%主峰面积）×1.5

    结果显示：三批样品有关物质均在1.5%以内，考虑今后生产因素，参照原料标准，将本品有关物质限定为1.5%，并列入质量标准。6  小结

    综上所述，参考《中国药典》2005年版二部附录规定的检测方法［5］及相关的参考文献，根据雷贝拉唑钠原料性质、口服制剂的国家标准及注射剂制剂通则，确定了合适的、较好的注射用雷贝拉唑钠的鉴别、检查方法，并采用高效液相法测定有关物质及含量。通过验证，该分析方法准确、可靠、方便、快捷，很好地满足了本文研究中的各项分析要求，可以作为检查注射用雷贝拉唑钠质量的检测依据，并列入注射用雷贝拉唑钠的质量标准中。

【参考文献】
  1 刘宇宏，王世鑫.近年来质子泵抑制剂的研究进展.中国新药杂志，2001，10（3）：161-164.

2 康文力，王金生.新质子泵抑制剂的开发新品种.中国药业，2001，10（9）.

3 陈孝治.新一代质子泵抑制剂-雷贝拉唑.世界药品信息,2001,2（6）:52-53.

4 裴晓丽，刘明月.HPLC测定雷贝拉唑钠原料的含量及有关物质.中国药学杂志，2004，39（8）：631.

5 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部），2005年版.北京：化学工业出版社，2005，附录.

作者单位：225321 江苏泰州，扬子江药业集团