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【摘要】 目的 了解本院临床分离的大肠埃希菌的耐药性趋势。方法 收集2001年1月～2004年12月的临床标本，应用Microscan Autoscan-4半自动微生物鉴定及药敏测试系统进行细菌的鉴定和药敏分析以及ESBLs的初筛试验，采用纸片扩散法对可疑产ESBLs菌株进行确认实验。结果 耐药率较高的为：氨苄青霉素（91.8%）、复方新诺明（84.4%）、哌拉西林（89.2%），其次为头孢唑啉（72.4%）、庆大霉素（77.6%）、环丙沙星（75.5%）；耐药性较低的为亚胺培南（3.3%）、哌拉西林/他唑巴坦（11.2%）、阿米卡星（7.3%）。结论 亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星是目前治疗ESBLs大肠埃希菌的首先抗菌药物。第三代头孢菌素的长期使用是ESBLs菌株产生的主要因素。
【关键词】 大肠埃希菌；耐药；分析
近年来，随着第三代头孢菌素在临床上的广泛应用，临床分离的耐药株及多重耐药株日益增多。大肠埃希菌在本院的革兰阴性菌中的分离率排列在第一位，加强对其耐药性的监测，对临床正确地、针对性使用抗生素有重要的意义。现将本院2001～2004年临床分离的大肠埃希菌对14种抗生素的耐药性、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）与临床使用抗生素的关系，报道如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 所有菌株来自2001年1月～2003年12月门诊和住院患者的脓液、痰液、腹腔引流液、尿液、胆汁、胸水、白带、尿道分泌物等标本分离，质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922（阴性对照）、肺炎克雷伯菌ATCC700603（阳性对照）由湖南省临检中心提供。
1.2 初筛法 Microscan Autocan-4半自动微生物鉴定及药敏测试系统进行细菌鉴定和药敏分析，根据专家系统对药敏结果的提示：受试菌对CTX（头孢噻肟）、CAZ（头孢他啶）、AZT（氨曲南）、CRO（头孢曲松）任一药物耐药则视为可疑产ESBLs。
1.3 确认法 按照NCCLS文件推荐的标准纸片扩散确认法测定ESBLs，将CTX和CTX/CA、CAZ和CAZ/CA两种组药物纸片分别贴在同一个M-H琼脂平板上，每对纸片中心相距不小于24mm，35℃培养18～24h，若任何一组的纸片与相应不含克拉维酸的纸片抑菌环直径差值≥5mm确定为ESBLs阳性株。
1.4 纸片来源 CTX（头孢噻肟30ug）、CAZ（头孢他啶30ug）、CTX/CA（头孢噻肟/克拉维酸30/10ug）、CAZ/CA（头孢他啶/克拉维酸30/10ug）购自北京天坛生物技术开发公司（在有效期内使用）。
1.5 药敏试验 采用纸片扩散法（K-B法），按照NCCLS规定的标准判断药敏结果。
1.6 培养基来源 M-H琼脂培养基购自杭州天和微生物试剂有限公司（在有效期内使用）。
1.7 统计学处理 pearson χ2。
2 结果
2.1 两种方法检出ESBLs的比例 见表1。本文选用pearson χ2,df=1, P=0.522， P>0.5, 按α=0.05水准可认为两种方法差异无显著性。
表1 两种方法检出ESBLs的百分率（略）
2.2 确认试验中CTX与CAZ两组的检出率 见表2。本文选用pearson χ2,df=1, P<0.05 可认为两种方法差异有显著性。
表2 确认试验中CTX与CAZ的检出率 (略)
2.3 药敏结果报告 Autoscan-4鉴定仪显示可疑产ESBLs株后，经确认试验为阳性株，则应报告所有青霉素类、头孢菌素类、头霉素类、氨曲南为耐药，见表3。
表3 大肠埃希菌对14种抗生素的耐药率 （略）
注：*均为2001～2004年耐药率最高值。
3 讨论
自20世纪80年代中期以来，随着第三代头孢菌素在临床上的广泛应用，某些革兰阴性菌通过产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），获得了水解这些超广谱头孢菌素的能力，给临床治疗带来极大困难。ESBLs可通过质粒传播，在医院内引起暴发流行［1］，由于各地区耐药菌株的耐药趋势往往有所差异，对不同地区临床ESBLs菌株的耐药监测有其重要性。表1中显示出本院大肠埃希菌2001年ESBLs的检出率18.1%，低于文献报道的检出率［2］，2003年ESBLs的检出率为32.9%高于文献的报道［3］；2004年ESBLs的检出率为49.0%高于文献的报道［4］。且在确认试验中CTX组检出率高于CAZ组［3］，ESBLs株耐头孢噻肟的比率高，耐头孢他啶的比率低（由表2显示），是因为CTX-M型ESBLs产生而导致的［5］，这可能与本院广泛使用头孢三代类药物（尤其是头孢噻肟和头孢三嗪）有关。从表3显示耐药率较低的是：亚胺培南3.3%*、阿米卡星9.6%*、哌拉西林/他唑巴坦11.2%*仍然是治疗ESBLs菌株的最佳抗菌药物，与文献报道相符［6］。
调查显示，ESBLs菌的产生与使用第三代头孢菌素及复合β-内酰胺类抗菌药物有直接的关系。2001～2004年的114例ESBLs菌株，在做细菌培养之前的5～14天，100%的使用第三代头孢菌素及复合β-内酰胺类药物，63.2%使用过三代头孢菌素+任一种（氨基糖苷类、喹诺酮类、硝基咪唑类），31.6% 使用过三代头孢菌素+任一种（青霉素类、大环内酯类、氯林可霉素类），细菌耐药率呈上升趋势，对细菌进行耐药性监测以指导临床抗菌药物的应用有十分重要的意义，为了提高细菌培养的阳性检出率，临床医生在对病人经验用药前留取细菌培养的标本；在使用抗菌药物后，应定期进行耐药性监测。
【参考文献】
1 paterson DL,YUVL. Extended-sepectrcum beta-cactamasees:a Call for improved detection and contrvl.Clin Lnfect Dis,1999,29:1419-1422.
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6 赵建平，周秀岚，方君，等.超广谱及内酰胺酶的检测及耐药性.中华检验医学杂志，2002，25（2）：112-113.
(编辑：石 岚)
作者单位： 416000 湖南吉首，湘西自治州人民医院检验科