点击显示 收起
【摘要】 为了更好地制定中药现代化的质量标准，探讨高效液相色谱（HPLC）在中药质量控制中的应用，发现HPLC在中药质量控制中正发挥着积极作用，其样品提取，色谱条件选择等都有独特的特点;并且发现正相高效液相色谱，反相高效液相色谱等多种色谱在中药质量控制中发挥着不同作用。
关键词 HPLC 中药质量
由于国际知识产权，药品专利的保护，复关等一系列经济、政治因素，中药走向世界面临新的机遇和挑战
。一方面，由于气候、环境、社会、饮食等因素的影响，疾病谱发生了很大的变化，加之药源性疾病、营养性疾病、老年人疾病的增加，而化学药物疗效的欠佳或影响;某些药物的毒副作用与耐药性表现很突出，人们在“回归大自然”的热浪下，掀起了“中医中药热”。另一方面由于中药成份复杂，缺乏明确的有效成份含量标准和制药标准等原因，使中药一直没有得到合法地位。中药产品多以保健品、增补剂或食物添加剂等在市场流通，中医药在新的热浪冲击下，如何面对严峻的挑战。求生存、求发展，参与国际竞争是国人应该引起重视的研究课题 ［1］ 。
建立与现代化科学技术相适应的中药质量控制方法，是实现中药生产现代化非常关键的一环，多年以来，在这方面已对它们进行了大量的工作，并已取得明显的成绩，但至今仍有不少中药没有质量控制方法或方法不够理想。近年来HPLC分析法发展很快，应用日益普遍，它具有灵敏度高，分离效率高，易于操作和重复性好等特点，是对中药进行成分分析的一种极有价值的分析技术。在中药成分的含量测定、物种鉴别、药材加工炮制、采收和储存等方面已有大量的工作报道，因此成为中药质量控制的重要手段之一。如今HPLC在中药质量控制方面，正处于全面开花阶段，大量文献争先报道，除了正相色谱外，反相色谱也得到广泛应用，并且出现了离子对高效液相色谱、智能多柱高效液相色谱和络合高效液相色谱的应用。
1 高效液相色谱在中药质量控制中的应用
高效液相色谱在中药研究方面，早期主要用于中药化合物化学成分的分析。例如1978年贺贤国等从中华五味子中分离得到五味子甲、五味子乙、五味子丙，解决了薄层层析检查只有一个斑点，但药理实验毒性不稳定的问题 ［2］ 。1983年张红、贺贤国等对早期HPLC在中药研究中的应用作了一定的概述 ［3］ 。
由于HPLC具有适用范围广，分离效率高，流动相和分析柱使用方式及填料选择方便等特点，与其它传统的分析分离手段和仪器检测相比具有突出的优越性。使HPLC在中药质量控制方面出现了繁荣景象。1999年1月～10月有关文献报道达100多篇，并引起许多大型研究机构的关注。中国医学科学院、协和医科大学药物研究所与日本大正制药株式会社合作开展了中药高效液相色谱分析与质量评价的系列研究，完成了80个中草药的高效液相色谱分析及质量考查工作 ［4］ 。为HPLC在中药的质量控制发挥积极作用提供了依据，开拓了广阔空间。
在《中国药典》中，HPLC在质量控制中也发挥越来越重要的作用，表1是高效液相色谱在历版药典中的应用 ［5］ 。
表1 HPLC在历版药典中含量测量方法的统计比较 略
其中在中药应用方面相对落后，1995版《中国药典》中398个中药制剂中仅有小儿消炎栓、护肝片、愈风定心片等少数品种应用HPLC ［6］ ，但在2000年版药典中，明显增大了HPLC的应用力度。有92个中药品种利用HPLC测定含量，其中药材47个，中药制剂45个。
HPLC在中药质量控制中主要用于有效成份含量测定。其常用程序和方法如下:
（1）试样的提取:药材及中药制剂在测定前应根据其剂型和待测成分的理化性质，选择适当的溶剂和提取方法，将待测成分从剂型中提取出来。①方剂:小丸和冲剂研成细粉;药材粉末，散剂直接取样，准确称取适量，选择适当溶媒。常用甲醇或乙醇，浸泡一定时间，超声波振荡后提取或加热回流提取。②口服液:常用有机溶媒萃取，或者取适量口服液拌入适量硅藻土，混匀，干燥后用超声波振荡提取或索氏提取。③蜜丸:先剪碎，称取一定量，拌入适量硅藻土研匀，干燥，再根据待测成分选择适当溶剂提取。
（2）试样纯化:①过大孔树脂柱，可除去糖的干扰。②用聚酰胺柱纯化黄酮类成分。③生物碱类，先调pH值至碱性，再用氯仿提取。④过氧化铝和活性炭混合柱，可除去试样中少量杂质及色素。⑤用滤膜过滤或过PT系列色谱预处理小粒。
（3）色谱条件的选择:①色谱柱:常用YWK、YBK、C18。②流动相:常用甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-正已烷等。③检测器:多为紫外检测器，根据组分的吸收度，选择最佳波长。
（4）定量方法:定量方法为内标法和外标法，由于中药制剂成分复杂，出峰多且密，故多采用外标法。以试样的标准品作对照物质，相对比较以求得试样的含量，常用工作曲线法和外标一点法。
2 反相高效液相色谱法在中药质量控制中的应用
反相高效液相色谱法是HPLC应用最广的一个分支。反相键合相色谱，又称极性键合相色谱。键合相表面都是极性很小的烃基，如十八烷基硅烷键合硅胶（ODS或C18）而洗脱液大多采用强极性溶剂或无机盐缓冲液。在这种键合相色谱中，洗脱顺序恰好与正相色谱相反，即极性大的化合物先洗脱，极性小的化合物不易洗脱。因为键合相表面的官能团不易流失，溶剂的极性可以很大范围内调整，因此应用范围很宽，加之由其派生的反相离子对色谱法与离子抑制色谱法，可以分离有机酸、碱和盐等离子化合物，扩大应用范围 ［7］ 。近年来反相高效液相色谱在中药质量控制方面得到广泛应用。考查1998～1999年100篇HPLC应用于中药含量测定的文章中有29个用的是反相高效液相色谱。反相高效液相色谱柱:常用C18柱，柱长15～30cm，填料粒度5～10μm。流动相:甲醇-水，乙腈-水，甲醇-磷酸盐，乙腈-硫酸盐。可适当调节组分的配比和流动相的pH，个别流动相中添加离子对试剂。检测器多为紫外检测器。定量方法有内标法和外标法。
3 其它高效液相色谱在中药质量控制中的应用
3.1 智能多柱高效液相色谱 智能多柱高效液相色谱是在多柱切换高效液相色谱及智能化技术的基础上提出的新概念，根据分析样品成分繁多、性质复杂等特点，利用切换技术的模块或分离性能，把样品分块地切换进不同性质的色谱柱，再用合适的流动相洗脱。全过程采用智能化控制。智能多柱高效液相色谱可以较好地解决中药成分复杂，难以全面掌握其他成分，特别是有效成分而不便于控制其质量的问题，是中药质量控制较全面和先进的技术 ［8］ 。
3.2 络合高效液相色谱 络合高效液相色谱是通过形成络合物，利用HPLC来分离和测定无机物的方法，络合高效液相色谱具有灵敏度高，选择性好，能多元同时测定，并可进行价态分开法分析等特点 ［9］ 。中药及中药制剂中含有大量微元素与重金属，一方面这些微量元素参与了药物的作用，是中药发挥独特疗效不可或缺的一部分;另一方面，由于有害重金属的存在，增加了中药的毒副作用，影响了中药的国际化进程。络合高效液相色谱在这方面的有益探索具有积极作用。
中药质量控制是中药生产现代化的重要环节之一，是中药走向世界的重要保证，HPLC在此方面正发挥积极作用。但我们也要看到由于中药成分复杂，作用机制复杂，单纯测定几个指标并不能完全解决问题。如何发挥HPLC的优越性，不断提高中药质量有待进一步的研究。
4 高效液相色谱在中药质量控制中的应用部分实例
4.1 药材 洋金花（东莨菪碱） ［10］ 。
4.2 口服液 清热解毒口服液（黄芩甙） ［11］ ，蛇胆川贝液（胆酸） ［12］ 。
4.3 注射液粉针剂 丹参粉针剂（丹参素） ［13］ ，雷公藤（雷公藤甲素） ［14］ 。
4.4 片剂 复方黄连素片（盐酸小檗碱） ［15］ ，三七片（人参 皂甙Rg） ［16］ 。
4.5 丸剂 开胸顺气丸（橙皮苷） ［17］ 。
4.6 冲剂 胃脘舒冲剂（甘草酸） ［18］ 。
4.7 胶囊 天舒胶囊（天麻素） ［19］ ，胃利胶囊（橙皮苷） ［20］ 。
参考文献
1 潘旭初.面向21世纪中药新药的研究与开发.时珍国药研究，1998，9（1）:5.
2 贺贤国.植物学报，1978，20（1）:77.
3 张仁斌.高效液相色谱在医药研究中的应用，上海:上海科技出版社，1983，1.
4 中国医学科学院.常用中草药高效液相色谱分析.北京:科学出版社，1999.
5 李珍.从历版中国药典分析方法的统计与研究看我国药物分析方法的发展.药物分析杂志，1998，18（5）:349.
6 《中国药典》95年版.
7 杨军.反相高效液相色谱在中药质量控制中的应用.时珍国药研究，1998，9（2）:126.
8 赵芝兰.智能多柱高效液相色谱系统及其在中药质量控制中的作用.药学实践杂志，1998，16（2）:97.
9 李华斌.络合高效液相色谱法及应用.中国卫生检验杂志，1998，8（2）:123.
10 何静.HPLC测洋金花药材中东莨菪碱含量.药物分析杂志，1999，19（3）:174.
11 窦英.HPLC测清热解毒口服液中黄芩甙含量.中医药信息，1999，16（3）:57.
12 倪坤仪.RP-HPLC测蛇胆川贝液中胆酸含量.药物分析杂志，1993，13（1）:3.
13 关大卫.反相高效液相色谱法测丹素粉针剂中丹参素含量.药物分析杂志，1994，14（30）:36.
14 胡永胜.高效液相色谱梯度法测雷公藤制剂中雷公藤甲素的含量.色谱，1999，17（3）:265.
15 何兴官.HPLC测复方黄连素片中盐酸小檗碱的含量.华西药学杂志，1999，14（2）:123.
16 任世才.RP-HPLC法测三七片中人参皂甙Rg含量.中成药，1996，18（4）:14.
17 林翠英.反相HPCL测定开胸川灵气丸中橙皮甙的含量.天津药学，1999，11（1）:64.
18 朱兰.高效液相测定胃脘舒冲剂中甘草酸的含量.中草药，1999，30（5）:339.
19 刘金德.HPLC测天舒胶囊中天麻素含量.时珍国医药，1999，10（4）:246.
20 王晓风.高效液相色谱测定胃利胶囊中橙皮苷的含量.药物分析杂志，1999，19（3）:190.
作者单位:516500广东广州解放军广州军区药检所
（收稿日期:2004-03-19）
（编辑日 强）