HPLC法测定右旋雷贝拉唑钠中ｓ-异构体

【摘要】  目的 建立HPLC法测定右旋雷贝拉唑钠中ｓ-异构体。方法 采用Daicel Chiral－AGP （100mm×4.0mm，5μm）为手性色谱柱［1］，以乙腈－0.02mol/L磷酸盐缓冲液（12：88），用磷酸调节pH值至6.8为流动相，检测波长为292nm，流速为0.6ml/min，柱温为30℃。结果 右旋雷贝拉唑钠与ｓ-异构体达到了较好的分离，最低检测量为0.16ng 。结论 该法快速、准确，可用于右旋雷贝拉唑钠对映异构体的检查与控制。

【关键词】  高效液相色谱法；右旋雷贝拉唑钠；s-异构体

 【Abstract】  Objective  To determine s-isomer in rabeprazole sodium by HPLC.Methods  A Chiral-AGP column was used. The mobile phase was composed of 0.02mol/L phosphate buffer-acetonitrile （88:12） and the pH value was adjusted to 6.8 using phosphoric acid with 0.6ml/min flow rate at 292nm. The temperature of the chromatographic column was 30℃. Results  Rabeprazole sodium and its s-isomer were separated completely. The detection limit was 0.16ng.Conclusion  This method is rapid, simple and can be well used for the determination of s-isomer in rabeprazole sodium．

    【Key words】  HPLC; rabeprazole sodium; s-isomer

    右旋雷贝拉唑钠由印度EMCURE医药公司首家开发的新型质子泵抑制剂，现已在欧美上市，临床试验结果表明本品对胃烧灼痛及胃回流的疗效比雷贝拉唑钠明显提高，且症状缓解时间明显快于雷贝拉唑钠，本品疗效确切、安全性好。本文采用了α－酸性糖蛋白键合硅胶色谱柱测定其s－异构体的量。

    1  仪器与试药

　　Agilent 1100高效液相色谱仪；右旋雷贝拉唑钠原料由扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司提供，雷贝拉唑钠消旋体（纯度为99.3％）由常州康丽制药有限公司提供；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

    2  实验方法与结果

    2.1  色谱条件  采用手性色谱柱Daicel Chiral－AGP  （100mm×4.0mm，5μm），乙腈－0.02mol/L磷酸盐缓冲液（12：88），用磷酸调节pH值至6.8为流动相，检测波长为292nm，流速为0.6ml/min，柱温30℃。

    2.2  系统适用性试验  称取雷贝拉唑钠消旋体适量，用0.001mol/L 的氢氧化钠溶液溶解并稀释成每1ml中含0.1mg的溶液作为溶液（1）；称取右旋雷贝拉唑钠适量同法制成每1ml中含0.1mg的溶液作为溶液（2）；量取溶液（1）和（2）各20μl，注入液相色谱仪，分别记录色谱图为图1和图2。由图1可以看出，右旋雷贝拉唑钠与其s-异构体两者之间的分离效果较好，符合分离要求。图1  雷贝拉唑钠消旋体图2  右旋雷贝拉唑钠2.3  检测限  在上述色谱条件下，以信噪比S/N=3计算，右旋雷贝拉唑钠的检测限为0.16ng。

    2.4  溶液的稳定性  取右旋雷贝拉唑钠，用0.001mol/L的氢氧化钠溶液溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，分别于0、2、4、6、8h时取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果在8h内稳定，满足测定要求。

    2.5  专属性试验  取右旋雷贝拉唑钠适量，分别在酸、碱、氧化、高温及光照条件下进行破坏，结果在酸、氧化及高温条件下不稳定，易降解，但降解产生的峰不影响异构体的检测，表明该方法专属性强。2.6  样品中s-异构体的测定  称取右旋雷贝拉唑钠适量，用0.001mol/L的氢氧化钠溶液溶解并稀释成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液；取供试液适量，用0.001mol/L的氢氧化钠溶液稀释制成每1ml中含1μg的溶液作为对照溶液，再量取对照溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果三批样品中均未检出s-异构体。

    3  讨论

    3.1  雷贝拉唑钠中s-异构体几乎没有活性，所以要控制本品中s-异构体的含量，本法可以定量测出右旋雷贝拉唑钠中的s-异构体，从而有效控制其原料及制剂的质量。

    3.2  取右旋雷贝拉唑钠原料适量，加0.1mol/L氢氧化钠溶液制成每1ml中约含12μg的溶液，于200～400nm波长范围内测定紫外吸收，在292nm波长处有最大吸收，因此检测波长选为292nm 。

    3.3  在酸性条件下雷贝拉唑钠的化学结构可发生破坏性变化，出现变色和聚合现象，由于其在碱性条件下稳定，因此选用0.001mol/L的氢氧化钠溶液溶解样品，且不干扰检测。

    3.4  研究分别用甲醇和乙腈作为有机改性剂，发现在相同比例条件下，甲醇为改性剂时峰形很宽，且理论板数低，出峰时间较晚，因此选用乙腈作为有机改性剂。

    3.5  试验过程中发现流动相的pH值对主峰与其后面的一个小杂质峰的分离影响很大，因此采用在磷酸盐缓冲液与有机改性剂混合好后调节pH值，保证每次配制的流动相pH值比较接近，提高分析方法的稳定性。

【参考文献】
  1 金薇，杨永健，彭兴盛，等.　雷贝拉唑钠对映体在α1-酸性糖蛋白柱上的手性拆分. 药物分析杂志，2006，26（12）：1715-1717.

（编辑：黄 杰）

作者单位：225321 江苏泰州，江苏（泰州）新药研究院药物制剂新技术国家重点实验室