肿瘤特异性生长因子在诊断小儿恶性血液病中的临床意义

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    ［摘要］  目的  通过检测小儿恶性血液病患儿血清及尿液中的肿瘤特异性生长因子（TSGF）浓度，探讨两者在小儿恶性血液病诊断中的临床意义及两者的相关性。方法  采用生化比色法，检测36例恶性血液病患儿血清和尿液中的TSGF浓度并设立正常对照组（20例健康儿童）进行比较。结果  小儿恶性血液病血清及尿液中的TSGF浓度与正常对照组比较，明显升高（P<0.01）。恶性血液病组TSGF阳性率为80.5%（血清）和91.6%（尿）。各小儿恶性血液病之间进行血TSGF浓度比较，差异无显著性（P＞0.05），它们之间进行尿TSGF浓度比较，差异亦无显著性（P＞0.05）。血清和尿液中TSGF浓度呈显著正相关，r=0.6138（P<0.001）。结论  血清及尿液TSGF可以作为小儿恶性血液病的诊断指标，且具有很高的灵敏性。血清和尿液中TSGF水平与小儿恶性血液病类型可能无关。可以考虑用尿液中TSGF来代替血清中TSGF的检测。

    ［关键词］  恶性血液病；肿瘤特异性生长因子；诊断

     Clinical significance of serum and urine tumor specific growth factors in the diagnosis of malignant hematopathy in children

    LU Guanglong，CAO Enlai，TIAN Xianyu.Child and Maternity Hospital of Jining，Jining 272025,China

    ［Abstract］  Objective  To research the relativity and clinical significance of serum and urine TSGF levels in the diagnosis of malignant hematopathy in children.Methods  The levels of TSGF in serum and urine were measured by using chromatometry of biochemistry in 36 children with malignant hematopathy and 20 samples from healthy children as controls.Results  The value of TSGF in serum and urine of malignant hematopathy were significantly higher than those of the normal controls（P<0.01）.The total positive rate of TSGF in malignant hematopathy children were 80.5%（serum）and 91.6%（urine）.Among the different malignant hematopathy types,the serum TSGF level had no difference and so did the urine’s（P＞0.05）.The levels of TSGF in serum and urine of malignant hematopathy children showed positive correlation strongly（r=0.6138,P<0.001）.Conclusion  Determination of TSGF in serum and urine might be used in the diagnosis of malignant hematopathy in children and the sensitivity was high.The TSGF level had no relationship with malignant hematopathy types.The serum TSGF test is a method that might be replaced by the urine TSGF test.

    ［Key words］  malignant hematopathy;tumor specific growth factor;diagnosis

    肿瘤特异性生长因子（TSGF）是近年来发现的一种新的肿瘤标志物，在恶性肿瘤形成的初期，这类物质就会大量释放到外周血中，早期即可达到临床可以检测的浓度［1］,且敏感性高、特异性强［2］。我们对36例小儿恶性血液病患者血清及尿液TSGF水平做了测定并对其诊断意义做一探讨，现报告如下。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料

    1.1.1  恶性血液病组  该组为我院2004年9月～

    2006

    年8月住院及门诊就诊的患儿，依据诊断标准［3］，确诊为恶性血液病36例（男16例,女20例）,年龄2～13岁,平均7.5岁。其中包括急性淋巴性白血病（简称急淋，L1、L2）、急性粒细胞白血病（简称急粒，M2a、M3a、M4EO、绿色瘤）、MDS、慢性粒细胞性白血病（简称慢粒）、恶性淋巴瘤等。每例恶性血液病患儿同时留取血清及尿液标本。

    1.1.2  正常对照组  该组为我院同期门诊健康查体的儿童，经各项检查（血常规、尿常规、大便常规、肝功能、Xray胸部透视）均无异常，共20例（男女各10例）。年龄10个月～13岁,平均7岁。每位健康小儿亦同时留取血清及尿液标本。

    1.2  方法

    1.2.1  试剂及仪器  TSGF检测试剂盒（福建新大陆生物技术股份有限公司研制）；0412-1型离心机（上海医疗设备厂）；微量加样器（上海求精生化仪器厂）；BS-1型水浴箱（北京医疗设备厂）；721型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂）。

    1.2.2  标本采集  血液标本：清晨空腹抽取静脉血2 ml,以3000 r/min,离心5 min，分离血清立即检测。 尿液标本：取随机尿液5 ml，以2000 r/min，离心10 min，取上清液立即检测。

    1.2.3  检测  严格按TSGF试剂盒说明书进行，准确量取待测血清（或离心后的尿液上清液）40 μl,加入到盛有1 ml检测试剂的Ep管中,将Ep管加盖并充分混匀后置100 ℃水浴箱中加热15 min（准时）,取出置室温水浴（<20 ℃）冷却5 min后将反应液倒入比色皿中，以蒸馏水调零，然后用721型分光光度计在470 nm波长处比色，测定吸光度，查标准曲线，求出相应的TSGF含量（u/ml）。

    1.2.4  结果判定标准  小儿血清TSGF≥64 u/ml为阳性。尿液TSGF≥16 u/ml为阳性。

    1.3  统计学方法  使用SPSS 12.0软件包进行统计分析，计量资料结果用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较用两样本均数的t检验，多组间比较采用单因素方差分析及q检验，两指标间关系采用直线相关分析。以P<0.05为差异有显著性。

    2  结果

    恶性血液病组血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度与正常组比较均有显著增高（P<0.01）；几种常见类型的小儿恶性血液病血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度与健康组比较，差异均有极显著性（P<0.01）。见表1。表1  恶性血液病血清TSGF含量与健康组的比较  （略）注:血清中TSGF值与健康组比较，*P<0.01；尿液中TSGF值与健康组比较，#P<0.01

    几种类型小儿恶性血液病组之间进行血清TSGF比较，差异无显著性（P＞0.05）。它们之间进行尿液TSGF比较，差异亦无显著性（P＞0.05），见表2。由恶性血液病组患儿血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度生成的散点图可见散点有线性趋势，见图1。

    恶性血液病组患儿血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度呈显著正相关，几种常见的小儿恶性血液病血中TSGF浓度和尿中TSGF浓度均有正相关关系，见表3。图1  恶性血液病组患儿血清和尿中TSGF生成的散点图表2  几种小儿恶性血液病组之间进行TSGF浓度比较（略）表3  各组血清中的TSGF含量与尿中的TSGF含量对比结果（略）

    3  讨论

    肿瘤组织中血管的生成对肿瘤的快速生长和转移非常重要，是近年肿瘤学研究的热点之一。恶性肿瘤在形成和生长的初期，肿瘤组织内及周边毛细血管即出现大量增生，肿瘤血管增生涉及众多生长因子。血管生长因子直接或间接地刺激宿主的免疫细胞或基质细胞，促进内皮细胞的增殖与迁移，最终导致血管生长［4］。这些生长因子可来源于肿瘤细胞、单核巨噬细胞、内皮细胞等,TSGF即是其中的一种，它由肿瘤细胞产生，仅对恶性肿瘤血管增生起作用，因此具有恶性肿瘤特异性，它能促进肿瘤细胞的生长和周边毛细血管的大量增生。

    近年来文献报道，恶性血液病和实体瘤一样，也存在血管新生现象，血管形成及其调控因子与恶性血液病的发生及复发密切相关。目前研究较多的与肿瘤血管新生相关的调控因子有血管内皮生长因子（VEGF）、TSGF等［5］。研究表明，微血管生成在人类白血病中亦起关键作用,急性白血病骨髓微血管数目比正常对照组明显升高，炎性反应组则与正常对照组类似，并认为白血病细胞能诱导骨髓微血管生成，白血病细胞亦可能是新生血管依赖性的［6］。Du等［7］发现多发性骨髓瘤患者中骨髓血管密度明显增高，并且增高程度与骨髓中骨髓瘤细胞侵袭性密切相关［8］。研究证实MDS骨髓中微小血管密度明显增加［9］。研究显示,急性白血病骨髓组织中微血管生成亦是明显增加的,与实体瘤有相似之处［10］。这给TSGF应用于恶性血液病的诊断提供了理论基础。

    我们用生化比色法检测36例小儿恶性血液病、20例健康儿童（正常对照组）的外周血TSGF水平，结果显示小儿恶性血液病组明显高于正常对照组（见表1），差异有非常显著性（P＜0.01），灵敏度为80.5%，与文献报道一致［11］，说明血清TSGF测定是诊断小儿恶性血液病的一个良好指标。提示当小儿恶性血液病发生时，肿瘤细胞表达更多的TSGF，进而促使骨髓血管密度增加，给肿瘤细胞带来更多的营养物质，也表明小儿恶性血液病具有更高的血管生成能力，TSGF与小儿恶性血液病发生有关。由表1可知，几种常见小儿恶性血液病血清TSGF值与健康儿童组进行比较差异均有非常显著性（P＜0.01），而且阳性率较高，显示血TSGF对诊断具有广谱性，同时具有较高的敏感性。研究结果还显示，急性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞白血病、MDS、其他小儿恶性血液病，这几组之间进行比较（见表2），血清TSGF水平差异无显著性（P＞0.05），表明TSGF可能与小儿恶性血液病类型无关。

    在小儿患者中尿液标本比血液标本相对更容易采集且易于被患儿及其家属接受，有关尿液TSGF测定诊断恶性肿瘤的文献报道极少，且仅限于成人，尿液TSGF检测在小儿恶性血液病中的诊断意义尚未见文献报道，我们将35例小儿恶性血液病患者尿TSGF值与20例健康儿童进行比较（见表1），小儿恶性血液病患者尿TSGF含量明显高于健康儿童组（P＜0.01），说明尿TSGF测定对诊断小儿恶性血液病是有意义的。研究结果还显示，几种常见的小儿恶性血液病尿TSGF值分别与健康儿童组进行比较，差异亦有显著性（见表1），而且阳性率很高（91.6%）。表明尿TSGF值对几种常见小儿恶性血液病均有诊断意义，即尿TSGF对诊断具有广谱性。还发现，急性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞白血病、MDS、其他小儿恶性血液病，这几组之间进行比较（见表2），尿液TSGF水平差异无显著性（P＞0.05），表明尿TSGF水平与小儿恶性血液病类型无关。

    由恶性血液病组患儿血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度生成的散点图可见，散点有线性趋势（见图1），可知两变量之间有直线相关趋势。进一步计算各组小儿恶性血液病血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度的相关系数（见表3），可知各种常见的小儿恶性血液病血清中TSGF浓度和尿中TSGF浓度均存在直线正相关关系。查r界值表得各组P值均小于0.05，提示该正相关关系存在。

    另外，无论血清检测还是尿液检测，都有一部分TSGF呈现假阳性，其假阳性率分别为5%（血清）和15%（尿液），究其原因可能与体内非特异性小血管生长有关［12］，因而临床在检测中应注意排除假阳性，许叔祥等报道指出，对于初次发现阳性者，每6周复查1次，若连续两次即12周（3个月）保持阳性者，应进行肿瘤的定位检查，对3个月内下降的病人，可排除肿瘤。

    总之，血清及尿液中的TSGF检测对小儿恶性血液病的诊断均有很高价值，并具有广谱性和较高的敏感性。可以考虑用尿液中TSGF来代替血清中TSGF的检测。且该检验有操作简单、快速、准确、廉价等特点。值得临床推广。

    ［参考文献］

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    2  Sarandakou A, Phocas I, Botsis D, et al.Tumourassociated antigensCEA, CA125, SCC and TPS in gynaecological cancer. Eur J Gynaeco Oncol,2003,19（1）:73-77.

    3  张之南.血液病诊断及疗效标准，第2版.北京：科学技术出版社，1998,110.

    4  Torres JC, Derchain SF, Faundes A, et al. Risk of malignancy index in preoperative evaluation of clinically restrictied ovarian cancer.Sao Paulo Med J，2002,120（3）:72.

    5  许会彬,曹英林.急性白血病患者血清bFGF与TSGF水平的研究.实用癌症杂志,2005,20（2）:146.

    6  Padro T, Ruiz S, Bieker R, et al. Increased angiogenesis in the bone marrow of patients with acute myeloid leukemia. Blood，2000,95（8）:2637-2644.

    7  Du W, Hattori Y, Hashiguchi A, et al. Tumor angiogenesis in the bone marrow of multiple myeloma patients and its alteration by thalidomide treatment. Pathol Int,2004,54（5）:285-294.

    8  李莉,谢晓恬.血管内皮生长因子在儿童急性白血病发病中的作用.临床儿科杂志,2005,23（12）:856.

    9  Aguayo A, Kantanjian H，Manshouri T，et al. Angiogenesis in acute and chronic leukemias and myelodysplastic syndromes. Blood,2000,9（6）:2240.

    10  De Bont ES, Rosati S, Jacobs S, et al. Increased bone marrow vascularization in patients with acute myeloid leukaemia a possible role for vascular endothelial growth factor. Br J Haematol,2001,113（2）:296.

    11  左志通.血清TSGF、CYFRA21-1和NSE联合检测对肺癌的诊断价值.苏州大学学报,2005,25（2）:265.

    12  Noehler TM, Ho AD, Goldschmidt H, et al. Angiogenesis in hematologic malignancies. Crit Rev Oncol Hematol,2003,45（3）:227-244.

    作者单位： 1 272025 山东济宁，济宁市妇女儿童医院

    2 272400 山东济宁，嘉祥县人民医院

    3 518116 广东深圳，深圳市龙岗区妇幼保健院小儿内科

　　（编辑：周  蕊）