点击显示 收起
【摘要】 目的 研究凋亡抑制蛋白survivin在子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生中的表达差异以及在子宫内膜癌中表达与内膜癌预后相关因素的关系。方法 应用免疫组化SP法检测41例子宫内膜癌、26例子宫内膜复杂性增生和8例正常内膜标本中survivin蛋白的表达情况。结果 survivin蛋白在正常内膜没有表达。在子宫内膜癌中和子宫内膜复杂性增生中的阳性表达率分别是85.3%和30.8%，两者的表达有明显的差异（P<0.001），且子宫内膜癌组阳性细胞的染色强度明显比子宫内膜复杂性增生组强（P<0.001）。41例子宫内膜癌中，survivin的表达与肿瘤细胞的组织学分级、肌层浸润及临床-病理分期呈正相关（P<0.01、P<0.001和P<0.01）。结论 survivin蛋白与子宫内膜癌的发生有关，并且与子宫内膜癌的不良生物学行为有关，可为临床治疗提供有价值的信息，对估计预后有指导意义。
【关键词】 survivin;免疫组化;子宫内膜癌;子宫内膜复杂性增生
Expression of survivin protein in endometrial carcinoma, endometrial complex hyperplasia and its clinical significance
LU Zhao-ming.
Department of Obstetrics and Gynecology,The Affiliated Hospital of Luzhou Medical College,Luzhou 646000，China
【Abstract】 Objective To study the difference of expression of survivin in endometrial carcinoma and endometrial complex hyperplasia. And to analysis the correlation of expression of survivin with the prognosis of endometrial carcinoma.Methods Immunohistochemistry SP technology was used to detect survivin protein in 41 cases of endometrial carcinoma, 26 cases of endometrial complex hyperplasia and 8 samples of normal endometrial.Results The positive rate of survivin in endometrial carcinoma and endometrial complex hyperplasia was 85.3% and 30.8% respectively, but there was no stain in normal endometrial.The difference between the two abnormal groups was significant (P<0.001).Survivin expression in endometrial carcinoma was more intense than in endometrial complex hyperplasia (P<0.001). In endometrial carcinoma, the expression of survivin was significantly associated with histological grade,the presence of invasion to myometrium and pathological stage (P<0.01,P<0.001 and P<0.01, respectively).Conclusion Survivin may play an important role in the development of human endometrial carcinoma, and may be a useful independent prognostic factor in endometrial carcinoma.
【Key words】 survivin;immunohistochemistry;endometrial carcinoma;endometrial complex hyperplasia
Survivin是最近发现的一种凋亡抑制蛋白，国内外的研究显示该蛋白在正常成年人细胞组织中表达率较低或不表达，但是在人体的许多肿瘤细胞中呈现高表达，并且与这些肿瘤的不良生物学行为和不良预后有关［1］。此外在一些癌前病变组织中也有不同程度的表达，可为一些恶性肿瘤的早期诊断提供依据［1～3］。有关survivin在子宫内膜癌及子宫内膜复杂性增生中表达的研究较少。本实验应用免疫组化S-P法检测子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生中的survivin的表达，初步探讨该蛋白与子宫内膜癌的发生及其与子宫内膜癌的治疗和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 标本 选用我院1998～2001年有完整临床病理资料的41例子宫内膜癌、26例子宫内膜复杂性增生和8例因子宫肌瘤而切除子宫的正常内膜的存档蜡块，所有子宫内膜癌病例术前未进行放化疗，所有标本的HE切片均经病理科资深专家进行重新复诊。子宫内膜癌病理类型为:子宫内膜腺癌37例,鳞癌4例。年龄范围：37～62岁，平均（55.7±9.4）岁。 41例子宫内膜癌病例有30例行广泛性全子宫双附件切除加盆腔及腹主动脉旁淋巴结清扫术，11例行全子宫双附件切除术。按照1988年FIGO子宫内膜癌的手术病理分期标准：Ⅰ期21例，Ⅱ期2例，Ⅲ期7例。组织学分级：G1：19例，G2:18例，G3:4例。肌层浸润情况:无肌层浸润的4例，肌层浸润<1/2肌层的26例，肌层浸润>1/2肌层的11例。淋巴结转移情况：有淋巴结转移的3例，无转移的27例，未做淋巴结清扫的11例。
1.1.2 试剂 兔抗人survivin多克隆抗体(survivin Ab-2)工作液及免疫组化试剂盒均购自福州迈新公司。
1.2 实验方法 所有标本用40g/L甲醛固定后，石蜡包埋并5cm连续切片，采用免疫组化SP法检测survivin蛋白的表达，具体的实验过程参照说明书进行。
1.3 免疫组化阳性结果判断 阳性对照：由福州迈新公司提供阳性对照片。阴性对照：除不用一抗外，其余染色步骤与免疫组化染色过程相同。光学显微镜下，根据染色反应的强度及其阳性细胞数所占百分比记分，其中阳性细胞数≤25%为0分，26%～50%为1分，51%～75%为2分，≥76%为3分，染色反应强度：细胞不着色或与背景色相似为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，并根据这两项指标的积分分为四种，即阴性为0分;弱阳性(+)为1~2分，阳性(++)为3~4分，强阳性(+++)为5~6分。
1.4 统计学方法 使用统计分析软件SPSS 11.0对实验数据进行统计分析，方法为：（1）三组染色阳性率差异的比较采用卡方检验。（2）三组的染色强度差异的比较以及子宫内膜癌组中不同的病理类型、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移和手术病理分期染色强度差异的比较采用秩和检验。取P<0.05为差异有显著性。
2 结果
Survivin蛋白在正常子宫内膜中没有表达，在子宫内膜癌、内膜复杂性增生组织中表达定位主要在胞浆，少数有胞核表达，见图1～4，具体结果见表1～4。
表1 子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生survivin染色结果比较 （略）
注：χ2=18.323，P<0.001
表2 子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生survivin染色强度的比较（略）
注：Hc=17.976，P<0.001
表3 Survivin染色结果与子宫内膜癌临床病理参数的关系1 （略）
注:*未行淋巴结清扫的11例子宫内膜癌未列入手术病理分期
表4 Survivin染色结果与子宫内膜癌临床病理参数的关系2 （略）
注:**未行淋巴结清扫的11例子宫内膜癌未列入统计
3 讨论
Survivin是一种新发现的凋亡抑制蛋白(IAP)成员，该蛋白在分化成熟的组织中除了胸腺、生殖腺等有增殖能力的组织外都没有表达［1］，但是该蛋白在未分化成熟的组织如胚胎组织中和一些恶性肿瘤如直肠癌、膀胱癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、宫颈癌等中有比较高的表达，并与这些肿瘤的不良生物学行为及不良预后有关。此外还有研究表明survivin可能与一些肿瘤的发生有关，可为这些肿瘤的早期诊断提供依据［1～3］。
子宫内膜癌是女性生殖系统的常见恶性肿瘤，近年来的发病率不断上升。现在认为该肿瘤可分为两大类，一类的发病与雌激素有关，一般经历子宫内膜增生到不典型增生再到内膜癌的发展过程，而另一类与雌激素无关。子宫内膜癌由于进展相对较慢以及症状出现较早，其治疗效果在女性生殖系统恶性肿瘤中比较好，但是具有高危因素［（1）期别晚；（2）细胞分化差；（3）深肌层浸润；（4）UPSC、透明细胞癌、鳞癌等组织类型；（5）血管淋巴管受肿瘤细胞栓子侵入和淋巴结转移等］的子宫内膜癌的疗效及预后仍很差［4］。因此对子宫内膜癌做出早期诊断以及及早发现这些危险因素，对于临床选择治疗方式和估计预后具有重要的意义。
Survivin在子宫内膜的研究比较少，而且结论不一致。Konno R［5］等用免疫组化和RT-PCR两种不同的方法检测正常子宫内膜的survivin表达时发现，分泌期子宫内膜腺上皮只有细胞核内有较弱的survivin蛋白表达，而在增生期只有胞浆有极微弱的蛋白表达，用RT-PCR检测，在所有正常分泌期子宫内膜中都有survivin-mRNA的出现，而增生期的子宫内膜中survivin-mRNA的检出率是57%（4/7），正常子宫内膜组织中的survivin蛋白和survivin-mRNA表达的差异性，表明正常细胞的survivin的蛋白翻译有着严格的调控机制，而这一机制目前还不清楚。NoriyukiT［6］等的检测结果与Konno R的结果一致，而且他们还发现在子宫内膜癌和正常子宫内膜survivin蛋白的表达差异有显著性，在子宫内膜癌中survivin表达与子宫内膜癌的细胞低分化、深肌层浸润、较晚的手术-病理分期及细胞增殖指数和较差的生存率呈正相关，认为是子宫内膜癌早期诊断和预后判断的一个有用指标。
本研究通过免疫组化实验发现，survivin在子宫内膜复杂性增生和子宫内膜癌中都有不同程度的表达，但是两个样本的表达有明显的差异。具体为以下两个方面。（1）Survivin在子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生中的表达差异。笔者的实验发现survivin在正常子宫内膜没有表达，子宫内膜复杂性增生中的阳性率是30.8%,在子宫内膜癌的表达率是85.3%，在正常子宫内膜、子宫内膜复杂性增生和子宫内膜癌的survivin染色阳性率逐渐升高，表明在正常子宫内膜和子宫内膜增生症中由于某种原因导致一部分细胞表达出有功能的survivin蛋白，这些蛋白通过抑制凋亡，促进细胞的分裂增殖，促使子宫内膜最终癌变。因此survivin蛋白可能是子宫内膜癌变过程中的一个促进因素。survivin蛋白阳性可作为子宫内膜复杂性增生的一个高危因素并可作为子宫内膜癌早期诊断的一个客观标志物，对于两者的鉴别诊断和子宫内膜复杂性增生的随访观察和治疗可提供有价值的信息。（2）Survivin的表达与子宫内膜癌病理类型、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移及手术-病理分期的关系。现有的国内外研究认为，survivin蛋白与子宫内膜癌的不良生物学行为和不良预后有关。本实验表明：在染色阳性的子宫内膜癌细胞中，肿瘤细胞分化程度越低、出现肌层浸润以及肌层浸润越深，手术-病理分期越晚，染色中等阳性和强阳性细胞所占比例则越高，这与国内外的研究结论一致［6～8］，但是，笔者发现survivin蛋白与子宫内膜癌的组织学类型和淋巴结转移无相关性，这可能与本实验所选择的标本有关，即有淋巴结转移和其他类型子宫内膜癌的病例太少，另外也可能是不同类型的子宫内膜癌发病机制不同，因此导致我们的结果显示survivin蛋白在不同类型子宫内膜癌中表达无差异。由于survivin的阳性率与子宫内膜癌的细胞不良分化和深肌层浸润以及手术-病理分期有直接的相关性，检测survivin蛋白的表达情况对于临床上指导子宫内膜癌的治疗以及预后有重要价值。
至于为什么survivin能够与肿瘤的不良生物学行为和预后有关，现有的研究认为肿瘤形成后，基底膜被破坏和新生血管形成是肿瘤浸润转移的主要环节，而且新生血管对于肿瘤的生长有重要意义，survivin是生长因子诱导的保护性基因，研究证实［8］一些细胞因子如血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（BFG）和有丝分裂原刺激血管内皮细胞survivin的生成，抑制caspase-3的活性，阻止由肿瘤坏死因子和一些化疗药物引起的血管内皮细胞凋亡，有利于新生血管的形成和三维重塑。另外survivin抑制凋亡，有利于微转移的肿瘤细胞在转移部位的生存和增殖，这些都促进肿瘤的生长和转移，直接影响肿瘤的预后。因此笔者认为，survivin蛋白的阳性表达与子宫内膜癌的不良预后呈正相关，可能为survivin促进组织的微血管形成和抑制肿瘤细胞凋亡所致。
4 结论
Survivin蛋白可能是子宫内膜癌发生的一个促进因素。该蛋白在子宫内膜癌的出现是一个早期的事件，检测该蛋白对子宫内膜癌和内膜复杂性增生的鉴别诊断以及指导子宫内膜复杂性增生的治疗有一定的意义。
在子宫内膜癌中，survivin的表达与子宫内膜癌的细胞低分化、有无肌层浸润和浸润的深浅以及手术病理分期呈正相关，对于指导子宫内膜癌治疗和预后判断有一定的意义。
(本文图片见封三）（略）
【参考文献】
1 Clen R,Miller L. Control of programmed cell death by the baculoviruses genes p35 and IAP. Mol Cell Biol,1994,14: 5212-5222.
2 Rothe M, Pan M, Henzel W,et al. The TNFR2-TRAF signaling comples contains two novel proteins related to baculoviral inhibitor of apoptosis proteins. Cell,1995,83: 1243- 1252.
3 Duckett C, Nava V.A conserved family of cellular genes related to the baculovirus IAP gene and encoding apoptosis inhibitors. EMBO J, 1996,15:2685-2689.
4 Skoufias D, Mollinari C, Lacroix F,et al. Human survivin is a kinetochore-associated passenger protein. J Cell Biol, 2000,151(7): 1575-1582.
5 Thompson C. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science, 1995,267:1456-1462.
6 Tanaka C, Uzawa K, Shibahara T,et al. Expression of an inhibitor of apoptosis, survivin, in oral carcinogenesis. J dent Res，2003,82(8):607-610.
7 Ambrosini G, Adida C, Altier D. A novel anti-apoptosis gene, survivin, expressed in cancer and lymphoma. Nature Med，1997,3:917-921.
8 朱红霞，刘爽，周翠琦,等.抗凋亡基因survivin促进细胞转化的机制.中华医学杂志，2002，82（5）：338-340.
(编辑：田 雨)
作者单位： 646000 四川泸州,泸州医学院附属医院妇产科