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【摘要】 目的 应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术准确检测久治不愈或复发性慢性前列腺液中病原体DNA含量，为临床诊断和治疗提供依据。 方法 应用荧光探针标记引物的荧光定量PCR对246份前列腺液标本进行淋球菌（NG）、沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（UU）检测;其中3项检测结果均为阴性的82例患者，于清晨起床未小便时从尿道口取标本重新检测病原体。 结果 246份前列腺液病原体阳性率，NG为15.45%，CT为17.48%，UU为22.76%。其中82份尿道口分泌物病原体的阳性率，NG为9.76%，CT为28.05%，UU为23.17%。 结论 采用FQ-PCR检测慢性前列腺炎病原体，具有简便、快捷、特异性高、定量准确等优点，对其诊断和治疗有指导意义。对久治不愈或复发性患者，在清晨起床未小便时从尿道口留取尿道分泌物标本，可提高病原体的检出阳性率。
关键词 荧光探针 PCR 慢性前列腺炎 DNA
慢性前列腺炎是临床治疗非常棘手的男科疾病之一，查找病因尤显重要。淋球菌（NG）、沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（UU）是引起慢性前列腺炎的常见病因。而且NG、CT、UU引起的慢性前列腺炎在临床中一直呈上升趋势。目前许多医院仍在采用前列腺液镜检、培养、免疫学检测或常规PCR等方法进行前列腺炎病原体检测。前列腺液常规镜检虽然简便但不能确诊是何种病原体的感染。培养虽然特异性高，但所需时间长，而且有的病原体如CT、UU的培养灵敏度较低。检测病原体抗原灵敏度低，约105～107个病原体才能检测到 ［1］ 。常规PCR虽简便、快捷，但存在不能定量、易交叉污染等缺点。我院采用荧光定量PCR方法检测前列腺液病原体NG、CT、UU等，取得了较好的临床效果，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 标本来自2000年1月～2003年9月到我院泌尿外科就诊的成人男性患者。多数患者病程较长，临床症状或重或轻，久治不愈。患者经前列腺液涂片常规镜检，白细胞在（++）以上，未检出细胞内外双球菌，前列腺液支原体、衣原体培养为阴性。共收集前列腺液标本246例，年龄20～57岁。
1.1.2 仪器 personal cycler PCR扩增仪（Biometra公司）。DA620微量荧光检测器（中山医科大学达安基因公司）。
1.1.3 FQ-PCR试剂盒 NG、CT、UU试剂盒均为中山医科大学达安基因诊断中心产品。
1.2 方法
1.2.1 标本取材方法 前列腺按摩收集前列腺液于无菌试管中;或清晨起床未小便时，用消毒棉签插入尿道口捻转并停留数秒后，取出棉签放入加有1ml生理盐水的无菌试管中。
1.2.2 标本处理 采用常规碱裂解法提取DNA。
1.2.3 试剂盒使用方法 由中山医科大学达安基因诊断中心生产，按下列条件扩增:93°C2min预变性，然后按93°C45s及55°C120s，共做40个循环。
1.2.4 质量控制 均按试剂盒内提供的定量阳性质控标准品做定量阳性质控，用双蒸水做阴性对照。并参加卫生部的室间质评，能力比对实验成绩合格。
2 结果
2.1 FQ-PCR检测246例前列腺液标本结果 见表1。
表1 FQ-PCR检测246例前列腺液标本结果（略）
2.2 3项检测结果阴性者 尿道口分泌物检测结果其中3项检测结果均为阴性但仍有明显临床症状的患者82例，另在清晨起床未小便时从尿道口取分泌物检测结果，见表2。
表2 3项检测结果阴性者尿道口分泌物检测结果 （略）
2.3 NG、CT、UU检出阳性率 分别为19.51%（48/246），28.46%（70/246），32.11%（79/246）。
3 讨论
慢性前列腺炎的患者，采用前列腺液镜检、培养、免疫学检测或常规PCR等方法进行前列腺炎病原体检测，由于其方法的局限性，阳性检出率较低 ［2］ 。本文结果提示，FQ-PCR检测其病原体可作为首选方法。FQ-PCR技术 ［3］ 弥补了常规PCR易产生假阳性和不能定量两大技术缺陷，它利用了基因扩增的敏感性、分子杂交的特异性和光化学的精确性，把PCR、分子杂交和光化学融为一体，使PCR扩增和产物分析的全过程均在单管封闭条件下进 行。其简便、快捷、特异性高、定量准确等优点为临床提供了一个更方便、更可靠的诊断技术。
检测结果显示，3种病原体检出阳性率从高到低依次为UU>CT>NG，与王千秋 ［4］ 等报道相接近，UU是3种病原体中引起慢性前列腺炎的首位病原体。NG的检出阳性率低于CT，可能与患者已用多种抗生素有关。3种病原体的DNA含量偏低，与标本取材和患者长期多种药物治疗有关。由此，临床医生对慢性前列腺炎患者查找病因时，可首选FQ-PCR检测UU、CT、NG病原体。
从结果分析可看出，检测标本用尿道分泌物比前列腺炎液检出阳性率要高。所以对久治不愈或复发性的慢性前列腺炎的患者，尽可能说服患者，在清晨起床未小便时，用消毒棉签插入尿道口捻转并停留数秒后，将棉拭子放入加有1ml生理盐水的无菌试管中送检。本文中，82例前列腺液检测结果均为阴性但仍有明显临床症状患者，采用此法留取标本后，提高了阳性检出率。
前列腺液存在漏检阳性，其原因可能是:患者自身病原体的数量较少;患者在前列腺按摩前小便时尿道被动冲洗;病原体寄宿在上皮细胞中，取材时未取到含有病原体的细胞等。患者清晨起床未小便时，病原体经过一夜的繁殖，数量有所增加，此时留取标本可大大提高病原体的阳性检出率。不足是此取材方法会给医生和患者带来不便，但可以指导患者自己正确留取标本送检。
检测标本的取材，关系到病原体的阳性检出率，国外学者进行了一些探索 ［5］ 。建议临床医生采用两种标本互补送检，其能及时为临床提供准确的病原体定量检测结果和治疗依据，并为患者减轻一部分经济负担。
参考文献
1 何蕴韶.聚合酶链反应技术在医学检验中的应用和展望.中华医学检验杂志，1999，22（3）:133.
2 田永红.沙眼衣原体感染实验室诊断进展.国外医学·临床生物化学与检验学分册，2004，25（1）:35-38.
3 程钢，何蕴韶.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒.中华医学检验杂志，1999，22（3）:135.
4 王千秋，邵长庚.关于性病诊断标准的修订意见.中华皮肤科杂志，1998，31（3）:202.
5 Garrow SC，Smith DW，Harnett GB.The diagnosis of chlamydia，gonor-rhoea，and trichomonas infections by self obtained low vaginal swabs，in remote northern Australian clinical practice.Sex Transm Inf，2002，78:278-281.
（编辑一 凡）
作者单位:650011云南省昆明市第一人民医院
510089广东中山医科大学达安基因诊断中心