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【摘要】 目的 研究银黄方水煎液多极膜分离物的红外指纹表征和药效成分含量之间的关系，为建立FT-IR对多极膜分离过程中的在线质量控制提供科学数据。方法 采用傅里叶变换红外光谱（FT-IR）法和高效液相（HPLC）法，分析和比较银黄方水煎液、各个膜分离产物红外指纹表征及其相关系数；测定有效成分黄芩苷、绿原酸的含量，计算收率。结果 银黄方水煎液的红外特征指纹峰有29个 （νcm-1），超滤透析液红外特征指纹峰有34个（νcm-1），超滤截留液红外特征指纹峰有22个（νcm-1），纳滤截留液红外特征指纹峰有25个（νcm-1），纳滤透析液红外特征指纹峰有26个（νcm-1）。各膜分离物与水煎液的相关系数分别为0.9001、0.5436、0.8327、0.1128。所得膜分离产物以超滤膜透析液和纳滤膜截留液药效组分转移率最高，分别为黄芩苷87.65%和84.12%；绿原酸为92.90%和89.68%。结论 通过红外分析和含量测定可见在红外特征峰一致以及相关系数较高的膜分离物中，药效组分（黄芩苷和绿原酸）的含量亦较高。本研究方法的建立，可以对复方中药膜分离的在线质量控制提供科学数据。
【关键词】 FT-IR指纹 膜分离 银黄
The relationship analysis on IR characteristic of membrane separation fraction and content of effective constituents of Yinhuang
KONG Huan-yu,YANG Li-ping, SUN Su-qin et al.Wangjing Hosptial,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100700,China
【Abstract】 Objective To study the relation between the FT-IR fingerprint characteristics and the content of active ingredient on Yinhuang medicin broth and its membrane separation fraction.Methods We adopt FT-IR,the second order derivative and HPLC ,to analysis and compare the FT-IR fingerprint characteristics and the related ratio of Yinhuang medicinal broth and its membrane separation fraction; To detection the content of baicalin and caffeotannic acid and to calculate receipt rate.Results The FT-IR fingerprint characteristic that Yinhuang medicinal broth has twenty-nine peaks; that ultrafiltration dialysate liquid has thirty-four peaks; that ultrafiltration entrapment liquid has twenty-two peaks; that nanofiltration dialysate liquid has twenty-six peaks; that nanofiltration entrapment liquid has twenty-five peaks. the coefficient correlation of Yinhuang medicinal broth to each membrane separation fraction is 0.9001、0.5436、0.1128、0.8327 in order. In the membrane separation fraction, effective constituents diversion rate of ultrafiltration dialysate liquid and nanofiltration entrapment liquid is highest. Baicalin is 87.65% and 84.12% in order; caffeotannic acid is 92.90% and 89.68% in order.Conclusion In membrane separation fraction, when the infrared feature is conformity and coefficient correlation is higher,the content of effective constituents（baicalin and caffeotannic acid）is also higher.The establishment of this research technique may offer scientific basis for online quality control of the membrane separation of traditional Chinese medicine.
【Key words】 FT-IR fingerprint;membrane separation; yinhuang
膜分离技术在众多的分离方法中具有操作简单、连续作业、节能高效、分离效率好等优点。但是由于复方中药含有多种成分，结构复杂，分子量不同，因此在多极膜分离的过程中，即时了解各级膜分离产物中成分组成的变化和分布，可以有目的地进行目标产物的分离。笔者以银黄方膜分离物为考察对象，用红外光谱法（FT-IR）和HPLC法，通过银黄方膜分离物的红外指纹表征分析和药效组分的含量分析，建立从宏观到微观对复方中药膜分离过程中进行质量控制的方法，为膜分离工艺的设计和分离提取过程的质量控制提供科学数据。现报告如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 三达膜科技厦门有限公司生产的 UF－02型膜分离设备、S-610型超滤膜（聚砜材质，孔径0.05μm，截留分子量50万）、1812多功能膜分离设备、 S-372型纳滤膜（复合材质，孔径0.001μm, 截留分子量300）；Spectrum GX傅里叶变换红外光谱仪（Perkin Elmer公司），中红外DTGS检测器；高效液相色谱仪：Waters510型输液泵、U6k进样器、Beckman163型可变波长紫外检测器和杭州普惠Sepu 3000工作站。
1.2 试药 试验用原料药黄芩为唇形科黄芩Scutellaria baicalensis Georigi的干燥根，山东产；金银花为忍冬科忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或初开的花,山东产。黄芩苷对照品（批号：715-200010中国药品生物制品检定所）；绿原酸对照品（批号：110753-200212中国药品生物制品检定所）。水为高纯水，甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。
2 方法
2.1 药液制备 取黄芩、金银花按10、6、6、6倍加水量进行4次回流提取，每次1h，过滤，合并滤液作为银黄水煎液进行超滤膜分离，得到超滤透析液和截留液，超滤透析液再进行纳滤膜分离，得到纳滤透析液和截留液。
2.2 红外光谱供试品的制备 银黄水煎液、超滤透析液和截留液、纳滤透析液和截留液均冷冻干燥去除水分。黄芩、金银花粉碎过200目筛备用。
2.3 红外光谱供试品的测定 取供试品1～2mg，加入200mg溴化钾，混合研磨成均匀粉状，8Gpa左右的压力2～5min压片。测定范围4000～400cm-1，SPD速度2cm/s,增益为1,扫描信号累加16次,分辨率4cm-1。采用Spectrum for windows软件（Perkin-Elmer公司）和二阶导数、定性分析比较软件,根据相关系数比较两组供试品红外光谱之间的相似程度，对各个供试品化学组成的相似度进行分析。
2.4 含量测定 供试品为银黄水煎液、超滤透析液和截留液、纳滤透析液和截留液、黄芩、金银花。测定方法参见参考文献［1］。
3 结果
3.1 FT-IR的测定
3.1.1 银黄水煎液的红外指纹峰（νcm-1） 29个（n=3），即：1747，1731，1714，1696，1670，1633，1613，1579，1558，1542，1523，1494，1471， 1453，1412，1371，1287，1188，1156，1103，1079，1050，1024，977，961，915，889，868，818。相关系数结果见表1。
3.1.2 膜分离物的红外光谱数据 超滤透析液的指纹峰（νcm-1） 34个（n=3），即：1772，1730，1714，1695，1681，1669，1652，1643，1633，1623，1613，1586，1559，1525，1491，1470，1452，1414，1370，1306，1288，1189，1155，1103，1079，1046，1031，977，960，914，889，866，842，818。相关系数结果见表1。
超滤截留液的指纹峰（νcm-1） 22个（n=3），即：1758，1670，1614，1515，1491，1472，1453，1419，1371，1224，1157，1111，1076，1047，1019，956，912，888，867，854，833，810。相关系数结果见表1。
纳滤截留液的红外指纹峰（νcm-1）25个（n=3），即：1746，1698，1665，1633，1612，1579，1561，1516，1493，1468，1452，1410，1367，1307，1285，1190，1152，1103，1079，1033，987，961，915，865，818。相关系数结果见表1。
纳滤透析液的红外指纹峰（νcm-1） 26个（n=3）,即：1751，1733，1717，1698，1658，1646，1608,1555，1494,1473，1451,1436，1403,1383，1340，1263，1208,1159，1107，1075，1050，1019，907，875，848，824。相关系数结果见表1。表1 供试品红外二阶导数光谱
3.1.3 黄芩红外指纹峰（νcm-1） 41个（n=3），即1746，1695，1681，1666，1658，1647，1631，1612，1586，1569，1563，1543，1541，1504，1493，1480，1469，1450，1413，1357，1313，1295，1269，1246，1224，1191，1161，1146，1106，1079，1053，1034，1022，998，944，925，914，899，868，835，801。
3.1.4 金银花红外指纹峰（νcm-1） 21个（n=3），即：1738，1658，1627，1517，1499，1469，1378，1285，1197，1162，1110，1079，1050，1014，984，962，916，896，867，833，818。
3.1.5 二阶导数光谱数据
（1）银黄水煎液和膜分离物的二阶导数光谱见图1。
（2）黄芩的二阶导数光谱见图2。
（3）金银花的二阶导数光谱见图3。
1.银黄水煎液 2.超滤透析液 3.超滤截留液 4.纳滤截留液 5.纳滤透析液
图1 银黄水煎液和膜分离物红外二阶导数光谱图
图2 黄芩红外二阶导数光谱图
图3 金银花红外二阶导数光谱图
3.2 HPLC测定指标成分含量 按外标法以峰面积计算，得出供试液中指标成分黄芩苷、绿原酸的含量，结果见表2。
3.3 指标成分转移率 根据含量，计算超滤透析液和截留液、纳滤透析液和截留液中2个指标成分转移率［转移率=透析液（截留液）中黄芩苷（绿原酸）质量/原液中黄芩苷（绿原酸）质量］，结果见表2。表2 各药液的黄芩苷和绿原酸测定结果注：1n=3 ；以原液为100％计算
4 结论与讨论
4.1 原料药材黄芩和金银花的表征峰（νcm-1）黄芩为1072，金银花为1152、1103、1074、1049。
4.2 银黄水煎液和膜分离物的指纹表征。与其他膜分离物、黄芩和金银花比较，超滤透析液和纳滤截留液的特有表征峰均为1614cm-1（碳碳双键和碳氧双键的伸缩振动）和1074 cm-1（碳氧伸缩振动）。而超滤截留液和纳滤透析液在上述两个位置均无特征吸收峰。
银黄水煎液及其膜分离物的超滤透析液和纳滤截留液与原料药材黄芩和金银花的二阶导数光谱表明：黄芩在水煎液及其膜分离物中的吻合表征峰为1452cm-1；金银花在水煎液及其膜分离物中的吻合表征峰为1079cm-1。
4.3 超滤透析液、纳滤截留液及银黄水煎液相关系数比较。超滤透析液、纳滤截留液与银黄水煎液的相关系数分别为0.9001和0.8327；超滤透析液和纳滤截留液相关系数为0.8977，且三者的二阶导数光谱一致性较高，而超滤透析液和纳滤截留液的红外表征峰与超滤截留液和纳滤透析液的红外表征峰有明显区别。测定结果说明采用红外分析的方法，可以通过相关系数和二阶导数光谱的特征峰强度对各个分离产物加以鉴定和区别。
4.4 通过红外分析和含量测定可见在红外特征峰一致以及相关系数较高的膜分离物中，药效组分黄芩苷和绿原酸的含量亦较高，因此，可以通过进一步的大样本量的测定获得较多的数据量，建立相应的红外光谱数据库，用于生产工艺过程的快速分析和监控。
4.5 本法用于中药制剂的意义。鉴于中药尤其是中药复方所含化学成分的多样性和复杂性,只追踪有效成分的分析方法,难以全面体现膜分离前后药液的整体情况，而红外光谱法适合于中药复杂化学物质的分析，能反映混合物中所有成分的综合信息，且重复性好［2～5］。中药的整体用药性决定了其整体质量评价的必要性，红外指纹图谱能从整体化学成分差异程度的大小来说明提取分离等措施是否合乎要求，红外光谱法在物质宏观推断分析方面比其他分析方法更简便、准确、容易推广。本研究方法的建立，可以对复方中药膜分离的在线质量控制提供科学数据。
【参考文献】
1 孔焕宇,杨丽平,陈玉武,等.复方中药银黄口服液有效成分膜分离工艺及正交实验研究.中国实验方剂学杂志，2006，12（3）：1.
2 孙素琴,周群,秦竹.中药二维相关红外光谱鉴定图集.北京:化学工业出版社,2002,164；243.
3 芦锰,樊克峰,白雁,等. 红外光谱技术在中药整体质量评价中的应用.河南中医,2004,24（11）:78-79.
4 潘艳丽, 张贵君, 孙素琴. 黄金菊粉针药效组分红外指纹表征分析. 中成药, 2006,28（2）:172-175.
5 潘艳丽,肖培根,张贵君.金莲花傅里叶红外光谱鉴别及药效组分表征分析. 中国中药杂志,2006,31 （12）:1024-1026.
作者单位：100700 北京， 中国中医科学院望京医院