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高效液相色谱的类型
广义地讲,固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相,也应归于液相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。
通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实,有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类。表8-1列举了一些液相色谱方法。按分离机理,有的相同或部分重叠。但这些方法或是在应用对象上有独特之处,或是在分离过程上有所不同,通常被赋予了比较固定的名称。
表8-1 HPLC按分离机理的分类
类 型 | 主要分离机理 | 主要分析对象或应用领域 |
吸附色谱 | 吸附能,氢键 | 异构体分离、族分离,制备 |
分配色谱 | 疏水分配作用 | 各种有机化合物的分离、分析与制备 |
凝胶色谱 | 溶质分子大小 | 高分子分离,分子量及其分布的测定 |
离子交换色谱 | 库仑力 | 无机离子、有机离子分析 |
离子排斥色谱 | Donnan膜平衡 | 有机酸、氨基酸、醇、醛分析 |
离子对色谱 | 疏水分配作用 | 离子性物质分析 |
疏水作用色谱 | 疏水分配作用 | 蛋白质分离与纯化 |
手性色谱 | 立体效应 | 手性异构体分离,药物纯化 |
亲和色谱 | 生化特异亲和力 | 蛋白、酶、抗体分离,生物和医药分析 |
液相色谱仪流程图
现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件,然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统(记录仪、积分仪或色谱工作站)。此外,还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。图8-1是具有基本配置的液相色谱仪的流程图。
液相色谱仪的工作过程:输液泵将流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系,在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离,并依次随流动相流至检测器,检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。