Literature
Home药品天地专业药学实验技术色谱技术色谱分析实例

六种酚类高效液相色谱分析法实施细则

来源:中国色谱网
摘要:方法依据:美国EPA604和建设部饮用水标准分析方法――酚类高效液相分析法(研编中)。仪器:高效液相色谱仪:美国Waters公司AutoTraceSPE仪:美国Zymark公司。...

点击显示 收起

  酚类化合物是造成环境污染的工业化学品,天然有机物氯化或水消毒剂也能产生卤代酚副产物。酚有毒,它可使水带有讨厌的气味,味道和颜色。由于酚类对环境的危害性。我国饮用水卫生标准规定挥发性酚浓度〈 0.002mg/L,美国EPA要求分析十一种酚。

  1. 方法依据:美国EPA 604和建设部饮用水标准分析方法――酚类高效液相分析法(研编中)。

  2. 应用范围: 本方法适用于饮用水、地下水和地表水等中的挥发酚的测定。

  3. 干扰及消除:溶剂、试剂、玻璃器皿及所使用的仪器不洁将污染样品,使色谱图出现污染峰或使基线升高。通过对溶剂、试剂的滤膜过滤,重蒸馏纯化,清洗玻璃器皿消除污染峰,同时采用各个酚的特征波长来达到消除干扰和最佳检测条件。

  4. 基本原理:本方法水样前处理用固相萃取法,用固相小柱吸附水中酚类,然后用溶剂将其洗脱下来,经纯氮吹气浓缩至一定体积后,用反相HPLC分析。在反相色谱柱上以甲醇/水+醋酸为流动相把经预处理的酚分离成单个酚,用紫外检测器(或二极管阵列检测器),测定各酚的峰高或峰面积,以外标法进行定量。

  5. 仪器:

6. 试剂:

7. 测定步骤:

    1. 样品的富集:取水样500ml,加入硫酸调 1.5≤ PH ≤2,若样品有余氯,则加入约20mg无水 Na2SO3 脱氯。在AUTOTRACE工作盘上编制下列程序:

      Step1: Process 6 samples using the following procedure

      Step2: Clean each sample path with 15ml into solvent waste

      Step3: Clean each sample path with 30ml into aqueous waste

      Step4: Dry column with gas for 1 minute

      Step5: Pause and alter operator, resume when CONTINUE is pressed

      Step6: Wash syringe with 5ml of DI water

      Step7: Wash syringe with 5ml of MeOH

      Step8: Condition column with 10ml of MeOH into solvent waste

      Step9: Condition column with 10ml of DI water into aqueous waste

      Step10: Load 500ml of sample onto column

      Step11: Rinse column with 10 ml of DI water into aqueous waste

      Step12: Dry column with gas for 0.5 minutes

      Step13: Soak and collect 2ml fraction using THF

      Step14: Pause for 3 minutes

      Step15: Collect 2ml fraction into sample tube using THF

      Step16: END

      并调节参数:Cond Flow: 15.0 ml/min

      Load Flow: 10.0 ml/min

      Rinse Flow: 20.0 ml/min

      Elute Flow: 5.0 ml/min

      运行上述程序,用4ml THF收集,供HPLC分析用。

    2. HPLC 分析:

      1. 色谱条件:流动相:A-甲醇/1%(v/v)醋酸;B-纯水/1%(v/v)醋酸

流速:1.0ml/min

柱温:室温

梯度:根据具体仪器分离情况确定

2.0min AB=3070 1.0ml/min

10.0min AB=6040 1.0ml/min

16.0min AB=1000 1.0ml/min

进样量:50μl

检测波长:

酚类

苯酚

4-硝基酚

3-甲基酚

二氯酚

三氯酚

五氯酚

波长(nm

275

275

275

295

295

295

 

7.2.2 标准曲线:

标准用液的浓度:(参考)

酚类

苯酚

4-硝基酚

3-甲基酚

二氯酚

三氯酚

五氯酚

浓度(mg/L)

10.0

5.1

10.0

9.6

9.7

10.1

标准曲线的制作:(参考)

进样体积

份(ng

(μl)

苯酚

4-硝基酚

3-甲基酚

二氯酚

三氯酚

五氯酚

5

50

25.5

50

48

48.5

50.5

10

100

51

100

96

97

101

20

200

102

200

192

194

202

40

400

204

400

384

388

404

 

以峰高或峰面积为纵座标,浓度为横座标绘制标准曲线,用外标法定量分析。

8. 定量分析:

8.1 色谱峰的测量:可测量峰高或峰面积,根据标准曲线计算定量。

8.2 由化学工作站根据校准曲线定量计算。

8.3 计算公式:

由于标准液与被测样浓缩液进样体积相同。

被测样浓度按下式计算

Cx(μg/L) = A x Hx x Vt / Vi x Vs

A = 标准浓度 x 进样体积/标样峰高(μg/mm)

Hx 样品峰高(mm)

Vt 样品浓缩体积(μl

Vi 样品进样体积(μl

Vs 水样体积(L)

9. 方法检测限、精密度、准确度:

9.1 方法检测限:

500ml水样富集到4ml THF 中,进样量为50μl 的检测限:

苯酚

4-硝基酚

3-甲基酚

二氯酚

三氯酚

五氯酚

检测限(μg/L)

3.20

1.20

2.00

3.20

3.20

3.20

9.2 精密度

9.3 准确度

10. 质控:按总则5,水质检测质量控制进行。

11. 安全:使用的溶剂和流动相甲醇有毒,正己烷、四氢呋喃易燃,均为挥发性溶剂,溶剂蒸馏必须遵照有关安全规定,工作场所要有良好的通风条件,严禁明火。分析的酚类为有毒物质,因此,要有保护措施。

 

   

作者: 2007-5-18
医学百科App—中西医基础知识学习工具
  • 相关内容
  • 近期更新
  • 热文榜
  • 医学百科App—健康测试工具