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1. 范围
本方法采用高效液相色谱法检测尿样中利尿剂类药物。
本方法适用于尿样中的利尿剂乙酰唑胺（Acetazolamide）的初筛。
检测范围：为200～2000ng/mL尿。
2. 原理
尿中利尿剂类药物多以原型形式存在，可以在酸性和碱性条件下直接进行萃取。基本步骤包括：分别在酸性和碱性条件下萃取，合并后吹干，定容，测定。
3. 试剂和材料
3.1 乙酸已酯
3.2 甲醇
3.3 乙腈
3.4 盐酸乙胺
3.5 酸性固体缓冲剂（pH约3.5）
分析纯磷酸二氢钾和磷酸氢二钠按重量比99:1混合，pH约3.5。
3.6 碱性固体缓冲剂（pH约9.5）
分析纯碳酸氢钠和碳酸钾按重量比3:2混合，pH约9.5。
3.7 Acetazolamide, Amiloride, Bendroflumethiazide, Bumetanide,
Canrenone, Chlortalidone, Clopamide, Ethacrynic acid, Furosemide,
Hydrochlorothiazide, Indapamide, Torasemide, Triamterene,
Spironolactone, Xipamide等（美国Sigma公司产品）
3.8 乙酸铅溶液，50g/L
3.9 带盖的普通试管
3.10 1ml小瓶
3.11 铝盖(11mm)
3.12 吸液尖，200μL、1mL、5mL
3.13 C18反相液相色谱柱
3.14 往复式振荡器
3.15 旋涡混合器
3.16 离心机
4. 分析仪器
4.1 高效液相色谱仪（二元泵），分析柱为HP18（250mm × 0.5mm × 3μm， 填料 为C18
，粒度为5μm），二极管阵列检测器。
4.2 仪器条件
检测波长为210nm，230nm，275nm，流速为1ml/min，采用磷酸盐缓冲液（A）（pH = 3）和乙腈（B）进行梯度洗脱，
梯度为： 0 min A 85％ B 15％
10 min A 70％ B 30％
20 min A 65％ B 35％
5. 试样制备
检测样：收集的尿样
阳性尿：由成年志愿者口服（个别需静脉注射）利尿剂药物的成品药，收集
相应时间段的尿液。
6. 操作步骤
6.1 提取
6.1.1酸性提取
于5mL尿样中加入2g酸性固体缓冲剂（pH约3.5）和4mL乙酸乙酯，震荡提取20分钟后离心分离。有机相中加入2mL乙酸铅溶液（50g/L），震荡5秒后离心分离。保留有机相。
6.1.2碱性提取
于5mL尿样中加入2g碱性固体缓冲剂（pH约9.5）和4mL乙酸乙酯，震荡提取20分钟后离心分离。有机相与酸性提取的有机相合并，在50ºC下用氮气流吹干有机相，残渣用500μL甲醇溶解。
6.2 仪器分析
取制备好的试样于HPLC上进样10μL进行分析。
7. 检测结果
将尿样与随行的标准品的液相色谱图及紫外光谱图进行对比，如吻合即可确定该尿样为可疑，从而完成利尿剂的初筛。
8. 精密度
（略）
9. 参考文献
兴奋剂检测的有关规定及相关方法。