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摘要:在熔融石英毛细管(75 mm×50 cm)中，以5 mmol／L Tris(三羟甲基氨基甲烷)+5 mmol／L H3BO3(pH=6.5)为电泳介质，采用毛细管电泳-方波安培检测法，实现了滴鼻液中盐酸麻黄碱的分离检测。探讨了缓冲溶液的种类、浓度、pH值、检测电位等因素对分离检测效果的影响。线性范围为0.8～202mg／L，检出限为0.3mg／L，回收率为92％～104％。
关键词：毛细管电泳，方波安培检测，盐酸麻黄碱，滴鼻液
1 引 言
急慢性鼻(窦)炎、肥大性鼻炎以及感冒引起的鼻塞是临床常见症状之一，多由各种需氧菌和厌氧菌混合感染所致。盐酸麻黄碱是滴鼻液中的有效成分，有松弛支气管平滑肌、收缩血管及兴奋大脑皮层的作用。建立快速、简便、灵敏和准确的检测方法对医药管理和质量监控具有重要的意义。
目前，麻黄碱的检测方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法和薄层扫描法。毛细管电泳技术以其高效、快速和样品用量少的特点，成为当前药物分析的研究热点。在CE的众多检测方法中，电化学检测具有灵敏、线性范围宽、选择性好、设备简单且费用较低的优点，具有较大的应用前景 。本实验报道在5mmol／L Tris+5mmol／L H3B03(pH=6.5)的缓冲体系中，采用高效毛细管电泳一方波安培检测法，对滴鼻液中的盐酸麻黄碱进行了测定，取得了满意的结果。
2 实验部分
2．1 仪器与试剂
CES2000毛细管电泳仪，包括高压电源、方波安培检测器、毛细管电泳数据工作站(中山大学化学院研制)；石英毛细管柱50cm x75μmi．d．(河北永年光导纤维厂)；CQ-2B型超声波清洗器(明珠电器厂)。
三羟甲基氨基甲烷(Tris，上海试剂二厂，分析纯)；硼酸(H3BO3，广州化学试剂厂，分析纯)；麻黄碱对照品(广州市药检所提供)；滴鼻液(江门得胜药业有限公司，批号zz-5485)；其余试剂均为分析纯，水为石英二次蒸馏水。
2．2 缓冲溶液和样品溶液的配制
分别配制100mmol／L Tris、H BO 储备液。再按需配成不同pH值和不同浓度的Tris-H3BO3的缓冲溶液体系。精确称取盐酸麻黄碱对照品10mg于100mL容量瓶中，用5mmol／L Tris+5mmol／LH3BO3的缓冲溶液定容，配成100mg／L的标准溶液。进样时再用缓冲溶液稀释至所需浓度。滴鼻液样品原液用Tris-H3BO3缓冲溶液稀释1000倍后直接进样分析。
2．3 实验方法
毛细管柱在进样前用0.1 mol／L NaOH、二次蒸馏水和运行缓冲溶液分别冲洗约5min。电化学检测池在超声波清洗器中进行清洗。更换缓冲溶液后，也须按上述步骤清洗毛细管。采用重力进样方式，进样高度差为20cm，进样时间为15s，分离电压为16kV。方波安培检测器的输出信号经数据工作站采集到微机中进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在室温(25℃)和相对湿度<75％的实验条件下进行。电极制作和实验装置参见文献。
3 结果与讨论
3．1 缓冲溶液体系和pH的影响
实验了磷酸盐、NH4Ac-HAc、NaOH-柠檬酸、Tris-柠檬酸和Tris-硼酸等多种缓冲体系，结果表明：在Tris-H3BO3体系中有最佳的电化学响应信噪比。缓冲溶液的pH直接影响着电渗流(EOF)和分离效果。一般在高pH值时，可观察到大的EOF；在本实验中，由于麻黄碱的叔胺基上的氮原子在酸性环境中可以接受一个质子带上正电荷，迁移方向与电渗流方向一致，因此出峰较快；而在碱性环境下，麻黄碱整个分子呈电中性，随中性物质一起流出，得不到：有效的分离。结果表明：当缓冲溶液的pH<4.5时，麻黄碱不能与样品中的其它组分有效分离；而当pH值逐渐增大至6.0～7.0时，麻黄碱才能与样品中的其它组分有效地分离。综合考虑实验情况，本文选择缓冲体系的pH值为6.5。
3．2 缓冲溶液浓度的影响
在HPCE中，提高缓冲溶液的浓度可改善样品分析的分离度，但缓冲溶液的浓度过大将产生大量的焦耳热，导致峰型变坏，分离度下降。在实际测定中，方波安培检测器输出的分析信号来自待测组分的法拉第电流与背景电流的差值。因此，选择合适的缓冲溶液浓度可以获得较高的灵敏度、信噪比和良好的分离度。考察了不同浓度的Tris-H3BO3缓冲溶液对分离效果的影响，结果表明：以5mmol／L Tris+5mmol／L H3BO3(pH=6.5)的缓冲体系为最佳。
3．3 分离电压和进样时间的选择
加大分离电压，可缩短分离时间，但导致电流增加，柱效和分离度反而下降。实验选择分离电压为l6kV。采用重力进样，进样高度为20cm。考虑到峰高、分离效率和进样精度，确定进样时间为15s。
3．4 方波平衡电位E的选择
影响测定结果的方波参数有3个：方波频率、方波振幅和平衡电位。
3．5 线性范围和检出限
在选定的实验条件下，麻黄碱标准品和滴鼻液样品的电泳谱图I所示。在此条件下，盐酸麻黄碱的峰面积和含量呈线性关系，线性范围为0.8～200mg／L；线性回归方程为Y=15.5+84.6X，相关系数r为0.997(Y为峰面积；X为浓度，单位为mg／L)。检出限(S／N=3)为0.3mg／L。
3．6 样品分析及加标回收实验
按实验方法对滴鼻液样品(盐酸麻黄碱标示值5g／L)用缓冲液稀释1000倍后直接进样测定。由回归方程计算其测试液含量以及原液中的含量。同时进行了加标回收实验。
3．7 电极的稳定性
电化学检测在CE中应用需解决工作电极的“中毒”问题。本实验采用了方波安培检测技术(SWAD)，连续进样30次，其测定结果(峰高)的RSD为3.5％，工作电极表现了良好的稳定性和重现性。
References
1 Mu Huijtin(穆惠军)，Guan Guiju(关桂菊)，Wang Hong(王宏)．Chinese of Li Shizhen Medicine and Materia Medica Research(时珍国医国药)，1999，10(7)：497—498
2 Yang Lei(杨蕾)，He Jianhua(贺建华)，He Xiaqiu(何夏秋)J．of Chinese Pharmaceaties(中国药学杂志)，2000，35(8)：548—550