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【摘要】 目的 目前临床上常用的检测血清降钙素原（Procalcitonin PCT）的方法：半定量免疫色谱法（PCT-Q）和定量发光免疫分析法（PCT-L），我们的实验目的是比较这两种方法的一致性，更好地为临床诊断、治疗服务。方法 73份人血清标本，分别采用PCT-Q和PCT-L两种方法检测PCT含量。PCT-Q检测结果将样本浓度分为四个级别，即：＜0.5 ng/ml、≥0.5＜2 ng/ml、≥2＜10 ng/ml和≥10 ng/ml。一致性用Cohen’s统计获得。结果 65.8 %样本PCT-Q与PCT-L的检测结果在同一级别，27.4 %样本检测结果上或下相差一个级别，一致性检验k=0.506，符合尚好。结论 虽然利用 PCT-Q检测血清PCT浓度快速并简单易行，但PCT-Q与PCT-L的检测结果并不总是一致的，对于有疑问或要求监测治疗的病例，PCT-L仍是首选的检测方法。
【关键词】 降钙素原；半定量；免疫色谱法；发光免疫分析法
Comparison of serum procalcitonin test between immunochromatograph and immunoluminometry
Sun Li-ping，Fu Jin，Hu Feng-hua，et al.Capital Institute of Pediatrics, 100020 Beijing
【Abstract】 Objective The coherence comparison of serum procalcitonin (PCT) between two methods: the semi -quantitative solid phase immunoassay（PCT-Q）and the quantitative luminometric assay（PCT-L）. Methods Seventy three samples were analyzed with PCT-Q. Results obtained were categorized into 4 concentration ranges : ＜0.5 ng/ml、≥0.5＜2ng/ml、≥2＜10 ng/ml和≥10ng/ml. In parallel, serum procalcitonin concentrations were measured with PCT-Q as a standard . The data of PCT-Q and PCT-L were analysied with Cohen’s k as a measure of concordance.Results 65.8% of samples were consistently categorized according to the results of PCT-Q and PCT-L . 27.4% of samples were categorized within the next higher or lower concentrations category in the methods . Cohen’s kvalue is 0.506. Conclusion PCT-Q was a quick and easy handle methods for serum PCT measurement. However the results of PCT-Q were not always identical comparison to the PCT-L. So PCT-L was a good choice for questionable cases and the monitoring of treatment.
【Key words】 procalcitonin(PCT);immunochromatographic test;immunoluminometric assay
降钙素原（Procalcitonin PCT）作为一种新的严重细菌感染早期诊断指标，在国外已广泛应用于ICU，并取得了良好效果。PCT是一个具有创新意义的诊断指标，具有三大突出优点，一是可用于疾病的早期诊断：严重全身性细菌感染2～3hPCT浓度开始升高，24～48h达到峰值。二是用于疾病的鉴别诊断， PCT是一种新的高敏感性和特异性细菌感染与非细菌感染鉴别诊断的指标［1，2］。三是它可用于感染病情的监测：PCT浓度与细菌感染严重程度呈正相关关系，随着感染的控制和病情的缓解，PCT浓度下降。目前临床常用检测PCT含量的方法有半定量免疫色谱法（Semiquantitative immunochromatographic test PCT-Q）和定量发光免疫分析法（Quantitative immunoluminometric assay PCT-L）。我们研究的目的是了解两种方法的符合程度和一致性，更好地为临床诊断和治疗服务。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 PCT-Q、PCT-L检测试剂盒（德国BRAHMS公司），Lumat LB-9507 PCT分析仪（德国BRAHMS公司制造），TS-100脱色摇床（北京市新技术应用研究所）。
1.2 标本来源及处理 本院门诊或病房患者，抽取静脉血2ml，离心10min（3000转/min），收集血清备用。样品在4h内检测，否则-20℃冰箱保存。
1.3 实验方法 血清标本73份，每份样品分别采用PCT-Q和PCT-L两种方法进行检测。
1.3.1 PCT-Q检测 利用一个标记有胶体金的抗catacalcin单克隆小鼠抗体（示踪剂）和多克隆绵羊抗降钙素抗体（固相）做检测。病人的样品（血清）200μl加到检测孔后，示踪元素就结合到样品中的PCT，形成标记的抗原抗体复合物。这个复合物在检测系统中借助毛细作用移动通过含有检测带的区域，在此过程中，标记的抗原抗体复合物就结合到固相的抗PCT的抗体上，形成一个夹心式的复合物。当PCT浓度≥0.5ng/ml，这个复合物呈淡红色条带，条带的颜色强度直接与样品中PCT的浓度成正比。没有结合PCT的示踪剂扩散到对照条带区，在那里被固定，能产生非常强烈的红色条带，这个检测系统的功能是通过这条对照带来测定的。30min后与参考卡片上提供的PCT浓度比色卡进行对比，报告样本的浓度级别 (＜0.5 ng/ml、≥0.5 ＜2 ng/ml、≥2＜10ng/ml、≥10 ng/ml)。
1.3.2 PCT-L检测 利用免疫化学发光检测人血清中PCT浓度的定量分析方法。20μl血清标本（或不同浓度标准液、对照液）加到检测管内，吸取250μl示踪剂至检测管（以上步骤在15min内完成），混匀，确保液相均匀。粘性箔遮盖管口，避光，放置在脱色摇床（300转/min）上室温（18℃～25℃）孵育70min。两种抗原特异性的单克隆抗体与PCT（抗原）的两个不同的结合位点（降钙素和降钙蛋白）结合，一种抗体是经化学发光标记（示踪剂），另一种固定在管腔内壁（包被管系统）。孵育期间，两种抗体与样本中的PCT反应形成“夹心复合体”，结果化学发光标记的抗体被结合到管腔内壁，一旦反应结束，多余的示踪剂被清除。用PCT分析仪对残留在管壁上的示踪剂发出的光进行定量分析，标本中化学发光强度直接与PCT浓度成正比。用标准液建立标准曲线后，患者血清中未知PCT浓度可通过标准曲线计算后读取数值。整个检测过程需2h左右，检测灵敏度0.1ng/ml。
1.3.3 以PCT-L为标准 PCT-Q与PCT-L的检测结果落在同一级别或相差上下一个级别为相互符合，否则为不符合。PCT浓度＜0.5 ng/ml为阴性结果。
1.4 统计学分析 采用 SPSS 12.0统计软件进行Cohen’s k统计，k= 0.4～0.6为符合尚好［3］。
2 结果
73份样本PCT-Q检验结果：27份样本＜0.5ng/ml，12份≥0.5＜2ng/ml，l8份≥2＜10 ng/m，26份≥10ng/ml。其中48份（65.8 %）样本与PCT-L的检测结果级别一致，20份（27.4 %）样本PCT-L与PCT-Q的检测结果上或下相差一个级别，68份（93.2%）样本符合，5份（6.2%）样本不符合。假阳性结果11例（15.1%），假阴性结果1例（1.4%）。见表1。一致性检验k=0.506，符合尚好。表1 PCT-Q、PCT-L检测结果比较
3 讨论
PCT是降钙素的前体物质，无激素活性，是分子量约为13KD的糖蛋白。从生理学上讲，PCT是由甲状腺C细胞产生的降钙素的激素原，随后PCT被特异性的蛋白酶裂解成降钙素、降钙蛋白和PCT的N末端残基，正常人血清PCT浓度＜0.1ng/ml［4］。当全身性的细菌、真菌或寄生虫感染时，PCT可明显升高［5］，这时大部分由甲状腺以外的组织产生，但它的合成部位、释放机制及在感染中的作用还不清楚［6］。不过，PCT浓度可以作为细菌感染的重要预测指标，严重细菌感染死亡患者有持久稳定的高PCT水平，而PCT浓度的下降表明了治疗的有效性［7］。
我们对73份血清标本分别采用PCT-Q与PCT-L进行检测，其中48份（65.8%）标本级别相同，68份（93.2%）标本符合，这个结果高于Kordek A（28.4%，88.0%）［3］而低于Meisner M（74.7%，99.2%）［8］的测量结果，与Korczowski B的检测结果相近［9］（67.7%，96.9%）。PCT-Q是一种半定量快速、有用的检测方法，既不依赖仪器，又不需要校准，但PCT-Q与PCT-L的检测结果并不总是一致，究其原因是视觉的影响和个体的主观判断，操作者判断结果依靠的是边界线水平，而在边界线浓度，正确判断的可能性为50%［8］。
我们的实验结果中假阳性11例（15.1%），假阴性仅1例（1.4%），这与Meisner M等的报道一致，假阳性的结果更经常地被观测到，即低的PCT浓度被高估，不过这对临床的负面影响较小，只是病人被更密切的照顾。相反，假阴性的结果出现的较少［8］。Desideri-Vaillant C［10］等的实验结果显示，PCT-Q检测结果较高，而病人无生理不适，PCT-L结果低于0.5ng / ml。Brahms公司对此进行了调查分析：人类抗鼠抗体是阳性的，而PCT-Q检测中的示踪剂是一种小鼠的单克隆抗体，这也可能是PCT-Q检测假阳性结果为什么更经常地被观测到的原因。
实验结果提示我们，PCT-Q＜0.5ng/ml时，全身细菌感染的可能性较小，当PCT-Q较高（≥2ng/ml），应依据患者的临床表现及其他检验结果综合判断，必要时利用PCT-L进行复查。PCT-Q是一种快速的检测方法（只需孵育30min），可在任何地方、不需要仪器设备、通过颜色比较直接得到测量结果，而PCT-L检测过程需2.5h，并受实验条件（PCT分析仪）、工作时间的限制。值得注意的是半定量PCT测量方法虽然不能达到定量PCT测量的精确度，但作为急性疾病的诊断指标，它具有足够的有效性［8］，可对怀疑全身性细菌感染病人进行筛查。对于有疑问的病例、或要求得到更精确的检测结果、或要监测治疗效果，PCT-L仍是首选的测量方法［9］。
【参考文献】
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8 Meisner M, Brunkhorst FM, Reith H, et al. Clinical experiences with a new semi-quantitative solid phase immunoassay for rapid measurement of procalcitonin. Clin Chem Lab Med, 2000,38(10) : 989-995.
9 Korczowski B,Malek U,Kowalczyk JR,et al. Two diagnostic assays for serum procalcitonin measurement in clinical practice.Przegl Lek,2003, 60(5):345-348.
10 Desideri-Vaillant C,Rouby Y,Cardon N,et al. Analytical interference in determination of procalcitonin by PCT-Q (Brahms). Pathol Biol(Paris).2006,54(5) : 293-295.
作者单位：100020 北京,首都儿科研究所
(编辑：李 木)