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【摘要】 目的 了解泌尿道感染大肠埃希菌对常用抗生素的耐药情况和产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的耐药特征，指导临床合理用药。方法 用VITEK-32、GNI+卡、GNS-120卡进行菌种鉴定、ESBLs检测和药敏试验。结果 引起泌尿道感染的93株大肠埃希菌ESBLs检出率为25.8%；除亚胺培南外，产ESBLs株对其他15种抗生素的耐药率均明显高于非产ESBLs株；所有受试菌对亚胺培南均敏感。结论 泌尿道感染大肠埃希菌的耐药性日益严重，要重视ESBLs的检测，治疗时应根据药敏试验结果选择抗生素。
【关键词】 大肠埃希菌；泌尿道感染；超广谱β-内酰胺酶；耐药性
Detection of extended spectrum β-lactamases producing escherichia coli in urinary tract and drug resistance analyse
DENG Jian-kang, GUO Xiao-lan.
Department of Clinical Laboratory, Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College, Nanchong 637000,China
【Abstract】 Objective To analyze the constituent ratio and drug resistance characteristics of ESBLs producing bacteria-Escherichia coli in urinary tract and provide the reference for the clinical antibiotics usage.Methods Drug susceptibility tests and ESBLs producing strains were detected with Vitek-32 auto microbial evaluation instrument,GNI+, and GNS-120.Results The ratio of ESBLs producing strain among 93 E. coli isolated from the urinary tract infection samples was 25.8%. Except imipenem, the drug resistance rate of ESBLs producing strains was much higher than that of strains no producing ESBLs to 15 types antibiotics, but susceptible to imipenem all.Conclusion Drug resistance of Escherichia coli in urinary tract infection became more and more serious, which suggested clinical treatment should choose the antibiotics according to susceptiblity tests and detection for ESBLs producing strains.
【Key words】 escherichia coli; urinary tract infection; extended spectrum β-lactamases; drug resistance
泌尿道感染在临床上比较常见，而大肠埃希菌是引起泌尿道感染的首要致病菌［1］，各地报道的抗生素耐药率也有所不同［2］。为了解泌尿道感染中大肠埃希菌ESBLs的产生及耐药情况，给临床提供选择抗菌药物的依据，本文对我院2003年5月～2005年1月从泌尿道标本分离的93株大肠埃希菌进行了ESBLs检测和药敏试验，现报告如下。
1 材料和方法
1．1 仪器试剂 Vitek-32型全自动微生物鉴定和药敏系统、GNI+鉴定卡、GNS-120药敏卡由法国生物梅里埃公司生产；VITEK比色计（V1210）由日本生产；MH琼脂，呋喃妥因和阿米卡星纸片为北京天坛生物股份有限公司产品。
1．2 标本来源 所有标本均为2003年5月～2005年1月我院疑为泌尿道感染的住院和门诊患者的中段尿。
1．3 质控菌株 标准菌株大肠埃希菌（ATCC 25922）、肺炎克雷伯菌（ATCC 700603）由卫生部临床检验中心提供，所有药敏、ESBLs质控结果均符合NCCLS最新颁布的药敏质控范围和要求。
1．4 细菌鉴定、药敏和ESBLs检测 所有实验菌株按要求分离纯化后用0.45%的盐水（美国Baxter公司）制成1.0麦氏单位（用VITEK比色计）的菌悬液，取50μl菌悬液到2.0ml 0.45%盐水中制成稀释液，将菌悬液和稀释液分别填充到GNI+和GNS-120卡中，用Vitek-32仪器进行细菌鉴定、药敏试验和ESBLs检测。呋喃妥因和阿米卡星采用K-B法，按NCCLS 1999标准操作及判断结果。
2 结果
2．1 细菌鉴定结果 用GNI+鉴定卡共分离出大肠埃希菌93株，同一患者多次分离到的同一菌株不重复计入。
2．2 ESBLs检出率 93株大肠埃希菌用GNS-120药敏卡共检出24株产ESBLs，检出率为25.8%。
2．3 药敏试验结果 通过测定93株大肠埃希菌对16种抗生素的耐药性，发现除亚胺培南外ESBLs产生株对抗生素的耐药率显著高于ESBLs非产生株。ESBLs株对青霉素类、头孢菌素类100%耐药，对亚胺培南100%敏感，结果见表1。
表1 93株大肠埃希菌及ESBLs阳性株和阴性株的耐药率 （略）
3 讨论
自20世纪90年代以来， 随着三代头孢为代表的β-内酰胺类药物的广泛使用，细菌的耐药性增加迅速并出现了产ESBLs菌株的流行。大肠埃希菌既是产ESBLs主要代表菌之一，又是引起泌尿道感染的首要致病菌［1］，产ESBLs也是大肠埃希菌对第三代头孢菌素耐药的主要原因，所以检测产ESBLs大肠埃希菌的发生率和耐药性，对临床治疗尿路感染病人有较大的指导意义。
ESBLs由质粒介导，底物谱广，能水解大多数青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类抗生素；此外产ESBLs菌的耐药基因编码经常与其它抗生素的耐药基因联结而使耐药性更加复杂［3］；ESBLs菌还可以通过接合、转化、转导等形式使耐药基因在细菌间传播，造成严重的耐药问题。用VITEK-32及GNS-120卡，可通过测定卡上头孢噻肟、头孢他啶和酶抑制剂克拉维酸的联合制剂以及单纯头孢噻肟、头孢他啶的最小抑菌浓度，根据其比值是否≥4来判断该菌是否为产ESBLs株。该法可以检测绝大多数来源于TEM和SHV类的ESBLs，不但简单快速，而且检出率高，特异性好，优于双纸片协同法［4，5］。VITEK-32对我院2003年5月～2005年1月引起泌尿道感染的93株大肠埃希菌共检出24株产ESBLs，检出率为25.8%。
GNS-120卡可同时进行药敏试验和ESBLs检测，在提高了工作效率时也节约了成本。从表1可知，除亚胺培南外，产ESBLs大肠埃希菌对多种抗生素的耐药性显著高于非产ESBLs株。产ESBLs株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、环丙沙星100%耐药；但对安曲南、头孢他啶在仪器测定结果中表现出一定的敏感性，由于临床治疗无效，这种表现敏感常常会误导治疗，所以对青霉素类、头孢菌素类、单环类抗菌药物，VITEK-32专家系统按照NCCLS规则全部修正为耐药；另外，临床应用证实头孢吡肟对产ESBLs细菌疗效差，也修正为耐药。产ESBLs大肠埃希菌对环丙/左氧氟沙星、庆大/妥布霉素、复方新诺明几种不同作用机制的抗菌药物具有很高的耐药率和交叉耐药性，这是由于产ESBLs大肠埃希菌携带编码ESBLs耐药基因的质粒，往往同时带有氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类等抗菌药物的耐药基因，表现为多重耐药现象［6］。产ESBLs大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为20.8%，这种耐药的机制可能与ESBLs的型及量有关，也可能是产ESBLs细菌同时产几种不同基因型酶，若这些广谱酶产量足够多时，则对复合制剂耐药［7］。另外，头霉菌素类药物头孢替坦、平常慎用少用的传统药物呋喃妥因、阿米卡星也有相当高的敏感性。在监测的这些药物当中，亚胺培南的敏感性最高，达100%，为首选治疗产ESBLs株已被普遍接受，但目前临床使用碳青酶烯类药物较为广泛，应严密监视，警惕碳青酶烯类药物耐药株的出现。
泌尿道感染是临床常见的感染性疾病之一，治疗泌尿道感染抗生素选用要以不良反应小、尿液中药物浓度高、细菌耐药性低为原则。对于大肠埃希菌引起的泌尿道感染，建议勿盲目使用头孢类抗生素，应及时进行尿培养，检测是否为产ESBLs株。对于产ESBLs大肠埃希菌的泌尿道感染，经验用药可选用碳青霉烯类、头霉菌素类、酶抑制剂复合剂以及呋喃妥因、阿米卡星等抗生素，但最好根据药敏试验的结果选择敏感的药物进行目标性治疗。
【参考文献】
1 Farrell DJ, Morrissey I,de Rubeis D,et al.A UK multicentre study of the antimicrobial susceptibility of bacterial pathogens causing urinary tract infection.J Infect,2003,46(2):94-100.
2 Gordon K A,Jones R N,Sentry. Participant Groups (Europe,Latin America, North America).Susceptibility patterns of orally administered antimicrobials among urinary tract infection pathogens from hospitalized patients in North America:comparison report to Europe and Latin America.Diagn Microbiol Infect Dis,2003,45(4):295-301.
3 周惠平.临床细菌学检验面临的挑战.中华医学检验杂志,1999,22(1):12-14.
4 Sanders CC,Barry AC, Washington TA,et al.Dectection of extended spectrum β-lactamase-producing members of family Entero- bacteriaceae with VITEK ESBL test. J Clin Microbiol,1996,34(12):2997.
5 吕火祥,刘建栋,沈蓓琼,等.全自动细菌分析系统在检测产超广谱β-内酰胺酶细菌中的临床应用.中华医学检验杂志,1999,22(5):284.
6 腾琳,苏芬,甄永强,等.产超广谱β-内酰胺酶细菌肺部感染及耐药性分析.中华医院感染学杂志,2002,12(12):948-949.
7 孙秋林,叶冬青,李旭.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性研究.中国抗感染化疗杂志,2004,4(1):33-35.
作者单位：637000 四川南充，川北医学院附属医院检验科
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