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【摘要】 目的 了解冠心病、动脉硬化患者的感染因子。对84例冠心病患者进行研究，其中包括急性心肌梗死（AMI）、不稳定型心绞痛（UAP）和稳定型心绞痛（SAP）患者。方法 应用酶免疫法测定患者血清中抗肺炎衣原体（Cpn）的IgM和IgG型抗体、抗幽门螺杆菌（Hp）的IgM和IgG型抗体、抗巨细胞病毒（CMV）的IgM型抗体。并与健康对照组进行比较。结果 AMI组Cpn和Hp感染高于健康对照组（Cpn IgG：P＜0.05；Hp IgM：P＜0.05；Hp IgG：P＜0.01）。CMV感染率与健康对照组比较差异无显著性。UAP组Cpn和Hp感染率高于健康对照组（Cpn IgG：P＜0.05；Hp IgG：P＜0.05）。CMV感染率与健康对照组比较差异无显著性。SAP组Cpn和Hp感染率高于健康对照组（Cpn IgG：P＜0.05；Hp IgM：P＜0.05；Hp IgG：P＜0.005）。CMV感染率与健康对照组比较差异无显著性。AMI组、UAP组和SAP组对各感染因子的感染率差异无显著性（P＞0.05）。结论 研究表明Cpn和Hp作为冠心病患者的感染因子，其联系较为明显。而CMV是否为冠心病患者的感染因子还有待于进一步研究。
【关键词】 冠心病；肺炎衣原体；幽门螺杆菌；巨细胞病毒
Study on infection factors of coronary heart disease
TANG Lin.
Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China
【Abstract】 Objective To study the infection factors of patients with coronary heart disease(CHD) and atherosclerosis.Methods Serum of 84 patients were studied.Among them are cases of acute myocardial infarction(AMI),unstable angina pectoris (UAP) and stable angina pectoris(SAP).Compared with the control groups,the sera were analysed for the presense of antibodies by ELISA.These antibodies included chlamydia pneumoniae (Cpn)-specific IgM and IgG antibodies,Helicobactor pylori (Hp)-specific IgM and IgG antibodies and cytomegalovirus(CMV)-specific IgG antibodies.Results Serological prevalences of Cpn and Hp infection were significantly higher in patients than in control subjects while that of CMV infection had no differences in patients and control subjects.The prevalences of the three groups(AMI,UAP,SAP) by the three infection factors(Cpn,Hp,CMV) had no differences in each other.Conclusion As the infection factors to develop CHD,Cpn and Hp have more significance than CMV.To determine whether CMV is a infection factor of CHD,more studies will be performed.
【Key words】 coronary heart disease；chlamydia pneumoniae；Helicobactor pylori；cytomegalovirus
冠心病（冠状动脉粥样硬化性心脏病，CHD）是指冠状动脉粥样硬化使血管腔阻塞导致心肌缺血缺氧而引起的心脏病［1］。根据冠状动脉病变的部位、范围、血管阻塞率和心肌供血不足的发展速度、范围和率的不同，临床将冠心病分为急性心肌梗死（AMI）、不稳定型心绞痛（UAP）和稳定型心绞痛（SAP）。动脉硬化是一个长期过程，在其发展过程中，血管内皮细胞的损伤、血小板的活化、凝血因子的活化、体内促凝与抗凝的失衡、高血脂、高黏血症及血流动力学改变等因子均促进血栓形成。近年来，感染因子的参与又引起临床医学界的高度关注［2～4］。目前多数研究认为，幽门螺杆菌（Hp）作为CHD感染因子作用很小，巨细胞病毒（CMV）感染亦非CHD的主要感染因子，而Cpn在感染因子中起较大作用［4］。还有研究肯定了肺炎衣原体（Cpn）是CHD最可能的一种感染因子［5］。本试验选取了84例冠心病患者为研究对象，利用酶免疫法和荧光抗体法，对患者血清中Cpn抗体、Hp抗体和CMV抗体进行定量测定，旨在研究Cpn、Hp以及CMV是否为冠心病患者的感染因子，为临床治疗提供科学依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集天津公安医院及北医大三院心脏科冠心病患者血液标本84份。患者中AMI患者43例，UAP患者25例，SAP患者16例。其诊断均符合WHO 1979年标准。男69例，女15例；年龄范围34～83岁，平均年龄61岁。健康正常对照组病例30例，年龄范围43～67岁，均排除冠心病之可能。
1.2 试剂与方法
1.2.1 试剂 （1）幽门螺杆菌IgM酶免疫测定试剂盒，批号BC-1053（Biocheck 公司）。（2）幽门螺杆菌IgG酶免疫测定试剂盒，批号BC-1052（Biocheck 公司）。（3）Bioelisa巨细胞病毒IgM免疫捕获试剂盒（Bioelisa 公司）。以上均严格按照试剂盒说明书进行操作。
1.2.2 Cpn IgG、IgM的测定 原理：应用荧光抗体法。抗原应用CWL-O29肺炎衣原体的原体涂片（由北京协和医院提供）。将待检血清加于抗原片上。若血清中含有抗Cpn抗原的抗体，则与涂片上的抗原结合。洗去所有未结合的物质。再加入异硫氰酸荧光素（FITC）标记的羊抗人血清的IgG和IgM抗体，其可与抗原抗体复合物结合。洗涤后在荧光显微镜下观察，读取原体处呈黄绿色荧光的血清最高稀释度，其与血清中存在的抗体的量成比例。方法：将待检血清经2倍系列稀释后加于抗原片上，37℃孵育30min。用洗涤液洗涤3次后分别加入适当稀释的FITC标记的羊抗人血清的IgG和IgM抗体，置37℃孵育30min，再以洗涤液洗涤3次后，在Olympus荧光显微镜下观察。若IgM抗体滴度＞1：32者视为现症感染，而IgG抗体滴度＞1：64者视为既往感染。
1.3 统计学方法 将AMI、UAP、SAP患者对感染因子感染率（%）分别与健康对照组进行比较，使用四格表资料的χ2检验；AMI、UAP、SAP患者对感染因子感染率之间的比较，使用行×列表资料的χ2检验。
2 结果
2.1 84例冠心病患者各感染因子的感染率 见表1。
表1 84例冠心病患者各感染因子的感染率
其结果显示：与健康对照组比较，CHD患者对Cpn感染率差异有非常显著性(Cpn IgG:P＜0.01)，对Hp感染率差异有显著性(Hp IgM:P＜0.05;Hp IgG:P＜0.005)，对CMV感染率差异无显著性(CMV IgM:P＞0.05)。
2.2 冠心病患者AMI组中各感染因子的感染率 见表2。
表2 AMI组各感染因子的感染率
其结果显示：与健康对照组比较，AMI患者对Cpn感染率差异有显著性(Cpn IgG:P＜0.05)，对Hp感染率差异有非常显著性(Hp IgM:P＜0.05; Hp IgG:P＜0.01)，对CMV感染率差异无显著性(CMV IgM:P＞0.05)。
2.3 冠心病患者UAP组中各感染因子的感染率 见表3。
表3 UAP组各感染因子的感染率
其结果显示：与健康对照组比较，UAP患者对Cpn感染率差异有显著性(Cpn IgG:P＜0.05)，对Hp感染率差异有显著性(Hp IgG:P＜0.05)，对CMV感染率差异无显著性(CMV IgM:P＞0.05)。
2.4 冠心病患者SAP组中各感染因子的感染率 见表4。
表4 SAP组各感染因子的感染率
其结果显示：与健康对照组比较，SAP患者对Cpn感染率差异有显著性(Cpn IgG:P＜0.05)，对Hp感染率差异有显著性(Hp IgM:P＜0.05;Hp IgG:P＜0.005)，对CMV感染率差异无显著性(CMV IgM:P＞0.05)。
2.5 AMI、UAP、SAP组之间各感染因子感染率的比较 见表5。
表5 AMI、UAP、SAP组之间各感染因子感染率的比较
其结果显示：3种冠心病患者对于各种感染因子的感染率均差异无显著性。
3 讨论
3.1 Cpn与冠心病的关系 衣原体是一类介于病毒和立克次体间的形态相似、严格细胞内寄生、有独立生活周期的原核细胞型微生物，主要引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎为多见［6］。人群中Cpn抗体的调查表明，5岁以内儿童极少发生感染，5～20岁为最易感年龄段（6%～9%），20岁以上达50%，老年人达70%。在成人中男性Cpn抗体阳性率高于女性。
本研究应用荧光抗体法测定84例患有AMI、UAP和SAP患者血清中抗Cpn的IgM和IgG型抗体。其结果显示，与健康对照组比较，AMI组、UAP组和SAP组对Cpn的感染率差异均有显著性。而3种冠心病患者之间对于Cpn的感染率差异均无显著性。
近年来，许多研究认为Cpn作为感染因子与CHD有相关性。Sessa等学者应用微量免疫荧光技术检测95例AMI患者，80例CHD患者以及50例对照血清中抗Cpn的抗体。结果为抗Cpn的 IgG抗体阳性率分别为58.2%（AMI组）、60%（CHD组）、38%（对照组）。与对照组相比较，AMI组P值为0.003，CHD组P值为0.0006，差异均有显著性［7］。Roivainen等学者证明了241例CHD患者血清中Cpn抗体显著高于对照组，认为Cpn感染可增加CHD发生的危险性［8］。
与以上结果相反，也有文献认为，Cpn感染不是CHD的危险因子。Hoffmeister等学者检测312例CHD患者与479例对照血清中抗Cpn IgG抗体，其感染率分别为88%和87%，统计学上差异无显著性（P=0.6）［9］。Nobel等学者应用MIF技术检测58例CHD患者和58例对照在一定时期内血清中的Cpn情况，其结果也表明Cpn感染与急性冠脉疾病无相关性［10］。
本研究表明，Cpn是CHD的一个感染因子。这与国内外大多数研究结果相一致。
3.2 Hp与冠心病的关系 Hp感染导致胃和十二指肠溃疡、慢性萎缩性胃炎已经肯定。近年来，有研究认为Hp是冠心病可能的感染因子之一，但大多数研究认为Hp感染与CHD无关。
本研究应用ELISA方法测定84例AMI、UAP和SAP患者血清中抗Hp IgM和IgG抗体。其结果显示，与健康对照组比较，AMI组、UAP组和SAP组对Hp的感染率差异均有显著性。而3种冠心病患者之间对于Hp的感染率差异均无显著性。
Khurshid等学者用ELISA测定方法测定121例CAD患者以及58例非CAD患者血清中的Hp。其结果表明，二者之间差异无显著性（P=0.63）［11］。Whincup等学者测定505例CHD患者及1025例对照血清中的抗Hp IgG抗体，其感染率分别为79%和72%，差异也无显著性［12］。
有少数研究认为，Hp感染与CHD有关。Pieniazek等学者用ELISA测定方法测定76例CAD患者和81例健康对照的血清中HpIgG抗体，其感染率分别为81.5%和51%，统计学分析表明差异有显著性［13］。
本研究认为，Hp是CHD的一个感染因子。这与国外多数研究结果不一致，故Hp感染是否为中国人CHD的感染因子，值得进一步研究。
3.3 巨细胞病毒（CMV）与冠心病的关系 CMV是一种典型的疱疹病毒。人群中CMV感染极为普遍。我国成人血清中约有90%有CMV抗体。初次感染多在2岁以下，亦常呈隐性感染。CMV感染后，机体可产生特异性IgM、IgA和IgE抗体。这些抗体可维持数月至终身［6］。宫内CMV感染与先天畸形有关。
本研究应用ELISA方法测定84例患有AMI、UAP和SAP患者血清中抗CMV的IgM抗体。其结果显示，与健康对照组比较，AMI组、UAP组和SAP组对CMV感染率差异均无显著性。而3种冠心病患者之间对于CMV的感染率差异均无显著性。
国外多数报道认为，CMV感染并不是CHD的危险因子。Rothenbacher等学者对312例冠状动脉狭窄患者以及479例对照血清中抗CMV的抗体进行检测。其抗CMV IgG型抗体概率分别为54.5%和49.9%（P=0.116）。统计学上差异无显著性［14］。Adler等学者使用逻辑回归的方法对900例正在进行冠状动脉造影的患者血清中抗CMV的IgG抗体进行评价。其结果为抗CMVIgG抗体水平与CAD无明显相关性（P=0.462）［15］。
本研究结果表明，Cpn是CHD的一个感染因子。此结果与国外大多数报道相一致；Hp可能是CHD的一个感染因子。此结果与国外多数报道不一致，值得进一步研究；CMV不是CHD的感染因子。这与国内外研究结果相一致。
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11 Khurshid A.A prospective,controlled study of Helicobacter pylori seroprevalence in cornoray artery disease.Am J Gastroenterol，1998，93(5):717-720.
12 Whincup P.Prospective study of potentially virulent strains of helicobacter pylori and coronary heart disease in middle-aged men.Circulation，2000，101(14):1647-1652.
13 Pieniazek P.Association of Helicobacter pylori infection with coronary heart disease.J Physiol Phamacol，1999，50(5):743-751.
14 Rothenbacher D.Cytomegalovirus infection and coronary heart disease:results of a german case-control study.J Infect Dis，1999，79(3):690-692.
15 Adler SP.Prior infection with cytomegalovirus is not a major risk factor for angiographically demonstrated coronary artery atherosclerosis.J Infect Dis，1998，177(1):209-212.
作者单位： 300070 天津，天津医科大学免疫教研室
(编辑：晓 青)