RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量

　　提要　采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量，以μ-Bondapak C₁₈柱(10 μm，4.6 mm×250 mm)为固定相，2%甲醇的乙腈溶液-0.1% 磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相进行测定，紫外检测波长284 nm，平均回收率为99.95%，RSD=0.93%(n=6)。
　　关键词　天乐口服液　橙皮苷　RP-HPLC

QUANTITATIVE DETERMINATION OF HESPERIDIN IN 
TIANLE ORAL LIQUID BY RP-HPLC

Zhan Shiqin　Li Kaimin　Zhou Shaofen
(Chongqing Institute for Drug Control　Chongqing 410015)

　　ABSTRACT　The content of hesperidin in Tianle oral liquid was determined by RP-HPLC. Hesperidin was separated by μ-Bondapack C₁₈ colunm(10 μm, 4.6 mm×250 mm).The mobile phase consisted of 2% methanol acetonitrile-0.1% phosphoric acid and 0.1% triethylamine aqueous solution(20∶80). The detection was at 284 nm. The average recovery was 9.95%, RSD=0.93%(n=6).
　　Key Words　Tianle oral liquid　　Hesperidin　　RP-HPLC

　　天乐口服液是由太子参、白术、陈皮等10味药材制成的复方制剂，具健脾开胃，消食导滞之功效，用于小儿脾胃虚弱、厌食等症。实验采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，被测组分分离完全，测定结果准确、可靠。

1　实验部分
1.1　仪器与试药
　　日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，C-R3A数据处理机；岛津UV-260型可见紫外分光光度计；TGL-16B高速台式离心机。橙皮苷对照品(自制，含量99.52%)；乙腈(色谱纯，上海生化化工助剂厂)；其余化学试剂均为分析纯。
1.2　检测波长的选择
　　取橙皮苷对照品，用所选流动相作溶剂，制成适宜浓度，在200～400 nm波长范围内测定吸收光谱，橙皮苷在流动相中的最大吸收波长为284 nm。
1.3　色谱条件
　　经多次试验，选择μ-Bondapak C₁₈柱(10μm,4.6 mm×250 mm，大连物化所)；以2%甲醇的乙腈溶液-0.1%磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相；流速1.2 ml/min；柱温40℃；检测波长284 nm。
　　在上述条件下由橙皮苷对照品，缺陈皮供试品(空白)、及天乐口服液供试品的色谱图(图1)可见，被测成分分离完全，供试品中共存组分不干扰橙皮苷的测定。

Fig 1　HPLC chromatogram of Tianle oral liquid
A Hesperidin　B Blank　C Tianle oral liquid

1.4　标准曲线测定
1.4.1　对照品溶液的配制　取橙皮苷对照品约10 mg，精密称定，置200 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用甲醇稀释成每1 ml中含6、12、18、24、30 μg橙皮苷对照品的溶液，经高速离心后即为对照品溶液。
1.4.2　标准曲线的测定　取不同浓度的对照品溶液，进样20 μl，记录色谱图。以峰面积与浓度绘制标准曲线，其回归方程为：
y=1897.9+38397.6x　r=0.9999(n=6)。
　　结果表明，橙皮苷在6～30 μg/ml浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。
1.5　回收率试验
　　分别取已测定含量的供试品6份，各加入一定量的橙皮苷标准溶液，按上述供试品的测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。
1.6　精密度考察
　　取橙皮苷对照品溶液20 μl，照上述色谱条件，按每次测定的峰面积值计算，测定结果为218090、217454、218173、219925、220323，平均峰面积值为218793，RSD=0.57%(n=5)。

Table 1　Results of recovery

1.7　含量测定
1.7.1　供试品溶液的制备　精密量取供试品溶液1 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，经高速离心即为供试品溶液。
1.7.2　分离测定　取供试品溶液，进样20 μl，在上述条件下测定，记录色谱图和橙皮苷峰面积，按回归方程或随行标准计算供试品中橙皮苷含量，结果见表2。

Table 2　Determination results of samples

* 重庆天乐制药有限公司
作者单位：重庆市药品检验所　重庆 400015

参考文献

1　　王宝　.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.399
2　　欧阳强，邱黎和，周郗竹.高效液相色谱法测定枳实、枳术丸中橙皮苷的含量.中成药，1996，18(7)∶9
3　　崔铉玫，迟彦春，金银河.HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中橙皮苷的含量.药物分析杂志，1996，16(5)∶321