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胃癌淋巴结增生与p53、nm23基因表达关系的研究
中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 基础免疫学
作者：王仰坤 马乃绪 李涌 王丽
单位：272000 山东省兖州市解放军第91医院病理科
肿瘤抑制基因p53的突变是人们研究较深入的基因,突变型p53促进细胞的转化〔1〕 。nm23基因的存在缺失、扩增和突变,与肿瘤的转移有关〔2〕 。我们对87例胃癌采用免疫组化方法,观察胃癌淋巴结反应性增生和癌转移与p53、nm23基因表达的关系。
材料与方法
1.对象:收集胃腺癌根治术标本87例,局部肿大淋巴结469枚(包括淋巴结反应性增生211枚和淋巴结癌转移258枚)。组织学类型：乳头状腺癌8例,管状腺癌17例,低分化腺癌35例,粘液腺癌22例和印戒细胞癌5例。标本经10％福尔马林液固定,石蜡包埋，4μm厚度切片,常规HE染色。有淋巴结反应性增生者32例(指每例有多枚淋巴结,无1枚淋巴结伴有癌转移的病例),有淋巴结癌转移者65例(指每例有多枚淋巴结,有1枚或1枚以上的淋巴结伴有癌转移的病例)。
2.淋巴结反应性增生观察方法:将淋巴结反应性增生分为早、中、晚3期。早期:淋巴组织弥漫增生,髓索加宽交错,少数病例仅在边缘窦有较少和/或较小的淋巴滤泡,增生的淋巴索间免疫母细胞和核分裂易见。中期:主要是淋巴滤泡相对增生,但滤泡的体积较小,淋巴结滤泡占切片面积的2/5至3/5，被膜窦多闭合。晚期:淋巴窦扩张明显,淋巴滤泡几乎不见。淋巴窦内大量巨噬细胞,有的聚集成群。
3.淋巴结转移癌的观察方法:将淋巴结转移癌分为四期。Ⅰ期:淋巴结的结构未受破坏,边缘淋巴窦或其它区域有单个或数个癌细胞侵犯,呈现散在或3个至5个细胞形成的癌灶；Ⅱ期:转移的癌细胞在整个淋巴结的切片面积占1/3以下,淋巴结被膜完整；Ⅲ期:转移的癌细胞在整个淋巴结的切片面积占2/3以上,淋巴结被膜完整；Ⅳ期:淋巴结及其被膜均被转移的癌组织侵犯,或侵及周围的纤维脂肪组织、肌纤维、腺体等,仅残存较少的淋巴组织。
4.抗体及染色方法:采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P),抗p53和nm23单克隆抗体为美国DAKO公司产品,即用型试剂盒,购自福州迈新公司。DAB显色,苏木素衬染。用PBS代替第一抗体作阴性对照,以已知的阳性标本切片作阳性对照,背景不着色为判断标准。各组间比较采用χ2检验。
结果与讨论
胃癌p53阳性表达增强的病例,局部淋巴结反应性增生较少,仅见一些晚期反应性增生淋巴结；而p53不表达的病例,局部淋巴结反应性增生较多,可见大量早期反应性增生淋巴结。相反,胃癌nm23阳性表达增强的病例,局部淋巴结反应性增生较多,可见大量早期反应性增生淋巴结；而nm23不表达的病例,局部淋巴结反应性增生者较少,仅见一些晚期反应性增生淋巴结。本组淋巴结反应性增生32例,p53阳性表达28.1%(9/32),nm23阳性表达81.3%(26/32)；淋巴结有癌转移65例,p53阳性表达56.9%(37/65),nm23阳性表达63.1%(41/65)。研究结果p53在淋巴结反应性增生中多是低表达,淋巴结有癌转移者多是高表达,这两种情况差异有显著性(P＜0.01)。nm23在淋巴结反应性增生中多是高表达,淋巴结有癌转移者多是低表达,两者差异有显著性(P＜0.01)。胃癌中伴有癌转移的淋巴结数量多、程度重(尤其是Ⅳ期的淋巴结癌转移)者p53多为阳性表达,相反nm23多为阴性表达。
p53基因点突变主要位于第5～8号外显子内,基因突变是多种恶性肿瘤发生和发展的原因之一。淋巴结反应性增生组与淋巴结伴有癌转移组比较,差异有显著性(P＜0.01),说明p53基因突变不仅与胃癌的发生有关,而且在淋巴结癌转移的发生中起着重要的作用。因此,早期预测淋巴结癌转移的趋势,了解淋巴结反应性增生和淋巴结癌转移及其分期,对制定合理治疗方案,将有利于患者预后的改善。
nm23定位于人体17号染色体长臂(17q22 ),编码产物为由152个氨基酸组成的相对分子质量为17×103的蛋白质,与核苷二磷酸激酶(NDPK)高度同源〔3〕 。本研究检测87例胃癌,发现淋巴结反应性增生数量多,或有较多早期淋巴结反应性增生者nm23阳性表达率增多,反之减少；淋巴结伴有癌转移的数量多,或有较多Ⅳ期的淋巴结癌转移者nm23阳性表达减少,反之增加。研究结果，nm23基因表达与淋巴结反应性增生的数量和分期呈正比；与淋巴结伴有癌转移的数量和程度呈反比。
本研究发现，早期胃癌和淋巴结反应性增生阶段,p53低表达而nm23高表达；而晚期胃癌和淋巴结伴有癌转移阶段,p53为高表达而nm23低表达。可能p53突变多发生在细胞的癌变过程中,nm23失活多发生在细胞的转移过程中。提示p53基因突变对nm23基因失活有一定影响作用,联合检测对胃癌的进展、转移，了解机体的免疫状态,以及预后有一定意义。
参考文献
1 Tahara E.Genetic alterations in human gastrointestinal cancer: the application to molecular diagnosis. Cancer, 1995,75∶1410-1417.
2 Sawan A,Lascu I,Veron M,et al.NDPK/nm23 expression in human breast cancer in relation to relapse,survival,and other prognostic factors:An immunohistochemical study.J Pathol,1994,172∶27-34.
3 Backer JM,Mendola CE,Kovesdi I,et al. Chromosomal localization and nucleoside diphosphate kinase activity of human metastasis suppressor genes nm23-H1 and nm23-2.Oncogene, 1993,8∶497-502.
(收稿：1998-03-04 修回：1998-06-20)