摘要:一、从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞1.取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。...
07-09-25摘要:2,4℃固定5min~30min(依抗原性质所定)。5.PBS冲洗3~4次,每次10min。5%戊二醛再固定15min~30min。7.PBS液冲洗3~4次每次10min。
07-09-25摘要:9ml,加1︰5~1︰10稀释的特异性免疫血清0。2.快速法(琼脂扩散法)(1)同经典法(1)、(2)步骤,制备免疫复合物。(4)在凹孔内,加入制备好的含病毒的免疫复合物悬液。由于琼脂糖的吸水作用,20min~30min后,可将...
07-09-25摘要:1.铁蛋白的提取⑴ 配制2%硫酸铵液,并以1Mol/L的NaOH或HCl调pH值,正好为5。取1g铁蛋白溶于100ml的2%硫酸铵液中。⑶ 1 500g离心(4℃)2h,去上清。仍加2%硫酸铵至100ml,混匀,离心,去除不纯沉渣。
07-09-25摘要:1mol/l PBS pH7。2冲洗3×5min。1mol/L甘氨酸PBS冲洗5min。4% Triton X-100 PBS 15min。
07-09-25摘要:造成误差的可能来源有以下几个方面:1.各种仪器:设备的准确性、稳定性、效率以及被污染等情况带来的误差。2.试剂的纯度、质量和稳定性的影响也是造成误差的重要因素。3.在放射免疫分析中一些基本操作,如取样...
07-09-25摘要:1.基本原理先将标准物或血样品与抗血清混匀,免疫反应6~24h,使抗原与抗体充分结合,甚至达到平衡,然后再加入标记抗原,与抗体反应12~24h,最后分离B与F,这称为顺序饱和分析法。应用顺序饱和加样,可以提高测...
07-09-25摘要:5M Tris-NaCl (TBS) pH7。 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜2。将组织切片缓慢放入烧杯。将烧杯移开火源,室温下自然冷却后取出切片,蒸馏水洗1次3分钟,TBS洗2次每次3分钟。
07-09-25摘要:1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预...
07-09-25摘要:(一) 原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体,再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查,观察到铁蛋白抗体所在的位置,即抗原所在。(二)材料与试剂1.马脾铁蛋白2.硫酸铵3.硫酸镉4.双异氰酸镉二甲苯(...
07-09-25摘要:(一) 原理 标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱。化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响。结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响...
07-09-25摘要:(一) 原理 免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直...
07-09-25摘要:采血(一)材料与试剂1.抗凝剂(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其钠盐或钾盐,它能阻止凝血酶原转化为凝血酶,进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白,从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml,市售...
07-09-25摘要:(一)原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应,然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体,离心去沉淀,测定上清液中的放射性强度,从而推算出待测样品的抗原含量。(二)放射免疫检测...
07-09-25摘要:(一)原理 当抗原遇到相应的抗体便形成抗原抗体复合物(Ag+Ab ↔。Ag -Ab),当用放射性同位素标记抗原再与相应的抗体结合便形成标记抗原和抗体复合物。即: Ag+Ab↔。 Ag-Ab。
07-09-25摘要:(一)原理将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时,沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影,就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线,作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影,...
07-09-25摘要:(一)原理利用酶标记抗原(抗体)和待测抗体(抗原)在电场中向一定方向移动,在比例适当的地方形成沉淀线,通过酶作用底物而显色,指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。02Mol/pH 8。1Mol/L pH7。
07-09-25摘要:(一)原理交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离,然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中,于是该抗原样品中的...
07-09-25摘要:(一)原理抗原在含有抗体的凝胶中进行电泳,在电场作用下,抗原向一个方向移动,在移动的过程中,逐步与凝胶中的抗体结合而沉淀呈火箭状。沉淀峰面积越大,说明抗原量越多,二者呈正相关,因此可用于抗原的定量测...
07-09-25摘要:6的琼脂凝胶中,抗体球蛋白只带有微弱的负电荷,在电泳时,由于电渗作用的影响,抗体球蛋白不但不能抵抗电渗作用向正极移动,反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷,将抗原置于负极,将血清抗体置于正极,电...
07-09-25摘要:(一)原理免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开,然后加入抗体做双相免疫扩散,把已分离的各抗原成分与抗体在...
07-09-25摘要:(一)制片选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片,洗净后浸泡于无水乙醇和乙醚等量混合液中。(二)固定除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外,一般均应固定。固定的作用有三:①防止标本从玻片上脱落。②...
07-09-25摘要:(一)免疫球蛋白的提取 (二) 荧光素1. 荧光色素的基本条件(1)具有化学活性基团,如异硫氰基(-NCS)等,易与免疫球蛋白结合形成共价键。(2)对免疫球蛋白无毒性,不影响抗体活性。(3)荧光效应高,与蛋白...
07-09-25摘要:8PB液洗脱,第一峰为IgA(含IgG)。10Mol/L NaCl)液洗脱,收集洗脱液 ,即为较纯的IgA液。
07-09-25摘要:10Mol/L ZnSO4液ZnSO4·7H2O 2。01Mol/L pH7。10Mol/L pH6。1Mol/L ZnSO4液,调pH至7。
07-09-25摘要:01Mol/L pH7。14Mol/L NaCl或0。1Mol/L pH8。14Mol/L NaCl)。
07-09-25摘要:(一)材料与试剂配制1.动物血清2.硫酸铵饱和溶液硫酸铵800g~850gH2O1 000ml加热至绝大部分溶质溶解为止,趁热过滤,置室温过夜,然后以28%NH4OH调pH至7。mlB液:0。80g加H2O至 1 000ml取A液19ml,B液81ml加水...
07-09-25摘要:免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高,常用的定量检测方法ELISA和RIA均基...
07-09-25摘要:一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。二、非特异性染色的原因1。避免方法:① 用以二抗相同种族的正常血清封闭切片。
07-09-25摘要:用此载玻片捞片时应注意组织要一步到位,并尽量减少气泡的存在,以免影响染色结果。2 HistogripTM:将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的Histogrip液中,停留1~2分钟,然后用双蒸水快速清洗三次,室温干燥或60o...
07-09-25摘要:2)水浴锅(二)、试剂 1)PBS缓冲液(pH7。 b、油和TBS(或PBS)配制。 8)TBS/PBS pH9。 (三)、操作流程 1、脱蜡和水化 脱蜡前,应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
07-09-25摘要:一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合...
07-09-25摘要:一、放射免疫分析的基本试剂(一)标准品标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。标准品除含量...
07-09-25摘要:当免疫组化染色没有出现预期结果时,应系统地查找原因,而每一次只能排除一种可能的原因。 对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正...
07-09-25摘要:良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节,每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,因此,要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事...
07-09-25摘要:片上涂一薄层甲醇,使血片固定,但不要滴加过多的甲醇,以免使白细胞胞浆凝聚,影响中毒性颗粒的观察。3计算方法共观察100个中性粒细胞,其细胞浆内出现深紫色异常颗粒者为中毒性颗粒。根据颗粒的粗细和多少可...
07-09-25摘要:3计算方法共计数100个中性粒细胞,视其细胞内碱性磷酸酶活力强弱,按Kaplow法五级记分表示。将每级阳性细胞百分比乘以各该级的分数所得分数之和,即为碱性磷酸酶的积分。分级的标准如下:a.中性粒细胞...
07-09-25摘要:1原理中性粒细胞中的碱性磷酸酶(简称碱酶)在一定条件下能使β-甘油磷酸钠水解释出无机磷,后者与钼酸试剂结合成磷钼酸复合物,再以氨基萘酚磺酸还原为钼蓝而呈现蓝色,用光电比色法求得所释放的无机磷含量,表...
07-09-25